改良型大鼠脊髓损伤模型的探讨及丹酚酸B对脊髓损伤的干预作用-病理学与病理生理学专业论文.docx

参考文献 29 综 述 33 致 谢 44 HYPERLINK \l _bookmark0 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果 45 个人简历 46 山西医科大学硕士学位论文 山西医科大学硕士学位论文 I I 改良型大鼠脊髓损伤模型的探讨 及丹酚酸 B 对脊髓损伤的干预作用 摘 要 目的： 建立一种闭合性大鼠脊髓半离断损伤模型；在模型基础上探讨中药制剂丹酚酸 B （Salvianolic acid B，SalB）于损伤局部注射对大鼠脊髓损伤后细胞内信号通路的 干预作用。 方法： 1. 腰段脊髓损伤模型复制：SD 大鼠 6 只，全身麻醉、无菌状态下，纵形切开背 部皮肤及筋膜，在不打开椎板的前提下采用注射器针头制成的脊髓损伤器沿脊柱后 棘突 T9-T10 间隙、紧靠棘突左侧垂直插入脊髓并向左侧做单向摆动和上下提拉，造 成大鼠腰髓一侧（左侧）离断性损伤。通过观察脊髓损伤后大鼠左右侧后肢行走能 力的比较、损伤局部形态学检测及损伤侧肢体的热痛反应、抓力测试等确定模型的 复制成功。2.采用免疫荧光染色技术观察丹酚酸 B 对大鼠腰段脊髓损伤后局部 PirB 及 Erk1/2 表达的影响。SD 雄性大鼠，220-250g。实验分为三组，每组 5?6 只大鼠。 A 组：为对照组，正常大鼠，不做任何处理。B 组：单纯一侧腰段脊髓损伤组：按 照模型复制方法复制腰段脊髓损伤模型，同时利用注射器针头所连接的注射器向损 伤局部或脊髓腔缓慢注射 0.9%生理盐水，30μl/只。C 组：丹酚酸 B 用药组：一侧腰 段脊髓损伤模型复制后，利用注射器针头所连接的注射器向损伤局部或脊髓腔内缓 慢注射丹酚酸 B 制剂， 5mg/kg 注射，总量 30μl。各组动物在处理后分笼正常饲 养，分别在 24h、1 周、2 周后测后肢抓力。2 周后取大鼠脊髓标本，处理后用免疫 荧光法和 Western blot 法检测脊髓中 PirB 和 ERK1/2 蛋白的表达量。 II II 结果： 用自制的注射器针头使大鼠脊髓损伤后大鼠出现明显的运动和感觉功能障碍。 大鼠麻醉苏醒后即刻出现一侧后肢瘫痪、拖地行走，但无排尿及排便失禁，动物一 般状态良好，后期未见合并感染。大鼠左后肢（患侧）对比右后肢（健侧）的抓力 和热痛反应明显降低（p 0.05）。肉眼观察大鼠脊髓，术后 24h 大鼠伤口处肿胀，1 周后伤口愈合，4 周时背部皮肤基本恢复正常。打开脊椎椎板后可见针头插入部位 位于腰髓段，此处脊髓仍充血肿胀，脊髓组织软化崩解。显微镜下观察 （HE 染 色）：术后大鼠脊髓的损伤区可见纵行脊髓纤维断裂，损伤区域内神经结构基本消 失，髓鞘不可辨认。在大鼠脊髓损伤局部注射丹酚酸 B 2 周后，大鼠的左后肢抓力 较损伤组大鼠有明显提高（p 0.05）。免疫荧光实验结果显示 PirB 大部分分布于脊 髓前角灰质中。用药组较单纯脊髓损伤组 PirB 的表达显著降低（p 0.05）。免疫荧 光实验结果显示，局部注射丹酚酸 B 两周后，损伤侧脊髓 ERK1/2 的表达较单纯脊 髓损伤组有所升高（p 0.05）。 结论： 用自制的注射器针头造成的脊髓损伤模型操作简便、损伤较小、重复性好，并 且因与注射器相连，可在造模同时局部给予药物/试剂进行干预，为探索脊髓损伤再 生困难的分子机制提供了实验基础。丹酚酸 B 可抑制 PirB 的表达并激活 ERK 的表 达来促进大鼠脊髓损伤后的脊髓修复。 关键词：脊髓损伤；脊髓半离断术；丹酚酸 B；PirB；ERK PAGE PAGE IV Establish of a New Model for Spinal Cord Injury in Rats and Effects of Salvianolic Acid B on the Injury Abstract Objective: Establishing new model of spinal cord injury without damage of vertebrate; Based on the model to investigate the effect of Salvianolic acid B, a major components of the traditional Chinese medicine Salvia miltiorrhiza on the intracellular signal protein after spinal cord injury. Method: 1. Model establishment of lumbar spinal cord injury: under general anesthesia and asepsis environment, m