氟、砷及联合作用对人成骨细胞活性及形态影响的实验研究-外科学(骨外)专业论文.docx

3 3 碳酸氢钠（NaHCO3） 上海虹光化工厂 甲醇 上海振兴化工一厂 DMEM/F12 培养基 Gibco 公司 胎牛血清（FBS） Gibco 公司 G418 HYPERLINK /link?url=asKZOXiNSKP4YfVysdn0KxW5bdhteq-KanPBxrLhB06WdvZZ829IHojItpQaNYx7 北京索莱宝科技有限公司 100×青链霉素混合液 HYPERLINK /link?url=asKZOXiNSKP4YfVysdn0KxW5bdhteq-KanPBxrLhB06WdvZZ829IHojItpQaNYx7 北京索莱宝科技有限公司 姬姆萨染液（Giemsa） HYPERLINK /link?url=asKZOXiNSKP4YfVysdn0KxW5bdhteq-KanPBxrLhB06WdvZZ829IHojItpQaNYx7 北京索莱宝科技有限公司 谷氨酰胺（L-Glutamine） HYPERLINK /link?url=asKZOXiNSKP4YfVysdn0KxW5bdhteq-KanPBxrLhB06WdvZZ829IHojItpQaNYx7 北京索莱宝科技有限公司 胰蛋白酶（Trypsin） HYPERLINK /link?url=asKZOXiNSKP4YfVysdn0KxW5bdhteq-KanPBxrLhB06WdvZZ829IHojItpQaNYx7 北京索莱宝科技有限公司 二甲基亚砜（DMSO） HYPERLINK /link?url=asKZOXiNSKP4YfVysdn0KxW5bdhteq-KanPBxrLhB06WdvZZ829IHojItpQaNYx7 北京索莱宝科技有限公司 四甲基噻唑兰（MTT） HYPERLINK /link?url=asKZOXiNSKP4YfVysdn0KxW5bdhteq-KanPBxrLhB06WdvZZ829IHojItpQaNYx7 北京索莱宝科技有限公司 96 孔板、24 孔板 Thermo Scientific 公司 6 孔板 Nunclon Surface 公司 细胞培养瓶 CORNING 公司 3 仪器 RT-6000 酶标分析仪 深圳雷杜生命科学股份有限公司 TS-8 型转移振荡器 其林贝尔仪器制造有限公司 SW-CJ-IFD 型洁净工作台 上海博迅实业有限公司医疗设备厂 YXQ-LS-100SII 型立式压力蒸汽灭菌器 上海博迅实业有限公司医疗设备厂 101A-3 型电热鼓风干燥箱 上海实验仪器厂有限公司 HHW21-420 电热恒温水温箱 北京市永光明医疗仪器有限公司 TG-16W 台式高速离心机 长沙湘智离心机仪器有限公司 80-2 离心沉淀机 上海荣泰生化工程有限公司 WP-UP-UV-20 实验室专用超纯水机 四川沃特尔科技发展有限公司 MCO-15AC 二氧化碳培养箱 日本 SANYO 公司 TE2000-U 倒置荧光显微镜 日本 Nikon 公司 AB104-N 型电子分析天平 梅特勒-托利多仪器 4 主要试剂的配制 4.1 DMEM/F12 培养基的配制 取 DMEM/F12 培养基一袋（15.6 g），碳酸氢钠 1.5 g，谷氨酰胺 150 mg， 4 4 G418 450 mg，充分溶解于 900 mL 灭菌双蒸水，调 PH 至 6.7-6.8，过滤除菌分装， 按 10%浓度加入胎牛血清和按 100 U/mL 加入青、链霉素混合液，4 ℃保存备用。 4.2 PBS 缓冲液的配制 取 NaCl 8.0 g，KCl 0.2 g，Na2HPO4·12H2O 3.58 g，KH2PO4 0.24 g，充分 溶解于 900 mL 双蒸水，定容至 1000 mL，高压灭菌，4 ℃保存备用。 4.3 四甲基噻唑兰（MTT）的配置 取 MTT 250 mg，充分溶解于 50 mL 备用的 PBS 缓冲液中，过滤除菌分装为 1 mL/支，-20℃避光保存备用。 4.4 姬姆萨工作液（Giemsa stain）的配置 取姬姆萨浓缩液 1 mL，姬姆萨稀释液 9 mL 充分混匀，使用前现配。 4.5 氟化钠的配置 称取氟化钠 282.88 mg，充分溶解于 10 ml 无菌双蒸水后（氟浓度为 12.8 g/L）， 过滤除菌分装，-20℃避光保存备用。 4.6 亚砷酸钠的配置 称取亚砷酸钠 222.08 mg，充分溶解于 10 ml 无菌双蒸水后（砷浓度为 12.8 g/L），过滤除菌分装，-20℃避光保存备用。 5 SV40 转染人成骨细胞的培养 5.1 SV40 转染人成骨细胞的复苏 由液氮罐取冻存 SV40 转染人成骨细胞株一支，于 37 ℃的水浴中快速融化