富血小板血浆通过TGF-β1延缓椎间盘退变的初步研究-骨外科学专业论文.docx

富血小板血浆通过 T 富血小板血浆通过 TGF-β1 延缓椎间盘退变的初步研究 中文摘要 富血小板血浆通过 TGF-β1 延缓椎间盘退变的初步研究 中文摘要 研究目的：探讨富血小板血浆（platelet-rich plasma,PRP）在延缓椎间盘退变 （intervertebral disc degeneration,IDD）中的作用，及可能存在的相关机制，为临床治 疗椎间盘退变性疾病提供可靠的实验基础和理论保障。 研究方法：实验分为体外和体内实验两部分。体外实验：分别采用显微镜下直接 计数法和 ELISA 法测定 PRP 中血小板数量和 TGF-β1 的含量；将体积分数为 10%、 5%、2.5%、1%的 PRP 加入兔髓核细胞，CCK-8 法于培养后 1～7 天测定细胞活性， 评价不同体积分数 PRP 对兔髓核细胞增殖的影响；选用最佳体积分数的 PRP 及 TGF-β1 抑制剂处理兔髓核细胞，用实时荧光定量 PCR 检测兔髓核细胞 TGF-β1、II 型胶原（collagen II）基因和聚集蛋白聚糖（aggrecan）基因 mRNA 表达水平的变化。 体内实验：选取正常体重成年新西兰白兔 12 只，随机分为造模组、PRP 注射组 及 PRP+ TGF-β1 抑制剂注射组，使用 18G 套管针针刺椎间盘造模，造模后 4 周行核 磁共振检查，证实椎间盘退变后，向 PRP 注射组退变椎间盘内注射自体 PRP，向 PRP+TGF-β1 抑制剂注射组退变椎间盘内注射 PRP 和 TGF-β1 抑制剂的混合溶液，分 别于注射后 4 周、8 周行核磁共振检查观察椎间盘信号变化，其后处死实验动物，取 出椎间盘并行组织学分析。 实 验 结 果 ： PRP 中 的 血 小 板 数 量 为 （ 1170.25±56.08 ） ×109/L ， 是 全 血 中 的 （4.15±0.28）倍；TGF-β1 的含量为（1180.13±45.88）pg/mL，是全血中的（3.65±0.60） 倍。PRP 加入兔髓核细胞 4 天后，细胞活力最强，后逐渐减弱，其中 2.5%体积分数 的 PRP 对兔髓核细胞的促增殖作用最强。PRP 处理兔髓核细胞后，TGF-β1、collagen II 和 aggrecan 基因 mRNA 的表达分别为作用前的（19.38±1.52）倍、（4.43±0.35）倍 和（11.81±1.87）倍，明显高于未处理组（P＜0.05），而加入 TGF-β1 抑制剂后，TGF-β1、 collagen II 和 aggrecan 基因 mRNA 的表达分别为作用前的（5.59±0.34）倍、（2.43±0.39） 倍和（4.19±0.50）倍，明显低于 PRP 处理组（P＜0.05）。向兔的退变椎间盘内注射 PRP 后，核磁共振显示椎间盘信号强度明显改善（P＜0.05），而同时注射 PRP 和 TGF-β1 I PAGE PAGE IV 中文摘要 富血小板血浆通过 TGF-β1 延缓椎间盘退变的初步研究 抑制剂后改善作用不明显。免疫组化结果分析也表明与对照组相比，注射 PRP 后髓 核细胞外基质内 II 型胶原含量明显增加，TGF-β1 阳性细胞数量明显增加（P＜0.05）。 结论：PRP 可改善兔髓核细胞增殖能力及生物学功能，而 TGF-β1 抑制剂可以明 显减弱这种作用。自体 PRP 注射到兔的椎间盘内可以延缓兔椎间盘退变的发展，甚 至具有一定的逆转作用。TGF-β1 是 PRP 发挥作用的重要因素之一。 关键词：富血小板血浆；TGF-β1；椎间盘；退变 作 者：袁晨曦 指导教师：杨惠林 教授 富血小板血浆通过 T 富血小板血浆通过 TGF-β1 延缓椎间盘退变的初步研究 英文摘要 The Role of TGF-β1 in Platelet-rich Plasma in Retarding Intervertebral Disc Degeneration Abstract Objective: To explore the effect of platelet-rich plasma (PRP) in retarding intervertebral disc degeneration (IDD), and the potential mechanism of this effect, in order to provide feasible experimental support and reference method for clinical treatment of intervertebral disc degeneration. Methods: Experiment was divided into