低切应力诱导血管细胞活化激酶C受体1表达及其在细胞增殖中作用-生物化学与分子生物学专业论文.docx

上海交 上海交通大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 低切应力诱导血管细胞活化激酶 C 受体 1 表达及其在细胞增殖中的作用 摘 要 血管重建（remodeling）是高血压、动脉粥样硬化等心血管疾病 共同的发病基础和基本的病理过程。低切应力（low shear stress， LowSS）与动脉粥样硬化血管重建的发生和发展密切相关，但其力 学生物学机制尚未得到彻底阐明。 在本实验室的前期工作中，应用差异蛋白质组学方法，对正常 切应力（normal shear stress, NSS, 15 dyn/cm2）和低切应力（5 dyn/cm2） 条件下体外培养的大鼠胸主动脉蛋白质表达图谱进行对比分析,筛 选并鉴定出 43 个差异表达的蛋白质，其中活化激酶 C 受体 1 （receptor for activated C kinase 1, RACK1）在低切应力作用下的血 管组织中呈高表达。 在此基础上，本文在细胞水平对 RACK1 的表达进行验证，并 探讨它在血管内皮细胞（endothelial cells, ECs）和血管平滑肌细胞 （vascular smooth muscle cells, VSMCs）增殖中的作用。应用平行平 板流动腔系统，对联合培养的大鼠 ECs 和 VSMCs 分别施加正常切 应力和低切应力，加载时间分别为 12 和 24 h；然后，采用 Western blotting 技术检测 ECs 和 VSMCs 的 RACK1 表达变化。在静态条件 下，应用 RNA 干扰技术抑制 ECs 和 VSMCs 的 RACK1 表达后，用 ELISA 方法检测细胞的增殖，Western blotting 技术检测 RACK1 和 磷酸化 Akt 的表达，以研究 RACK1 的表达对 ECs 和 VSMCs 增殖 的影响及其作用机制。 结果显示：① 与正常切应力相比，低切应力诱导了联合培养 ECs 和 VSMCs 的 RACK1 表达，且低切应力诱导 ECs 的 RACK1 表 达在先，诱导 VSMCs 的 RACK1 表达在后；② 抑制 ECs 和 VSMCs 的 RACK1 表达引起细胞的增殖下调； ③ 抑制 ECs 和 VSMCs 的 RACK1 表达上调了 Akt 的磷酸化水平。 上述结果表明，低切应力可诱导 ECs 和 VSMCs 的 RACK1 表 达，且 RACK1 的表达变化与细胞增殖相关，提示 RACK1 通过调控 血管细胞的增殖，参与了低切应力诱导的血管重建，其调控作用可 能与 PI3K/Akt 信号通路有关。 关键词：低切应力，RACK1，血管内皮细胞，血管平滑肌细胞， 增殖，血管重建，Akt THE ROLE OF RECEPTOR FOR ACTIVATED C KINASE 1 INDUCED BY LOW SHEAR STRESS IN PROLIFERATION OF VASCULAR CELLS ABSTRACT Vascular remodeling is an essential pathology of many cardiovascular diseases, including hypertension and atherosclerosis. It has been reported that low shear stress (LowSS) is associated with vascular remodeling. However, the mechanobiological mechanism by which LowSS induces vascular remodeling has not been well defined yet. In our previous study, the protein profiles of rat aortas cultured under normal shear stress (NSS, 15 dyn/cm2) and LowSS (5 dyn/cm2) ex vivo were compared. 43 differently expressed proteins between the vessels were revealed by two-dimensional electrophoresis (2-DE) and mass spectrometry (MS) analysis. In the present work, the role of receptor for activated C kinase 1 (RACK1), one of the identified proteins by prote