紫外吸收法测定核酸量2ppt课件.pptVIP

* ? 实验十六 紫外吸收法测定核酸含量 目的要求 学习紫外线（UV）吸收法 测定核酸浓度 的原理。 ? ?实验原理 核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统（－C＝C一C＝C 一），能够强烈吸收250~280nm 波长的紫外光。核酸（DNA，RNA）的最大紫外吸收值在260nm 处。在此波长处，核酸溶液的吸光率与其含量成正比关系，可用于定量测定。 ?实验原理 采用紫外分光光度法测定核酸含量时，通常规定：在260nm 波长下，浓度为1μg/mL 的 DNA 溶液其光密度为0.020，而浓度为1μg/mL 的RNA 溶液其光密度为0.024。因此，测定未知浓度的DNA（RNA）溶液的光密度OD260nm，即可计算测出其中核酸的含量。该法简单、快速、灵敏度高。 试剂和器材 1．试材：核酸样品DNA 或RNA2． 主要仪器 ：（1）分析天平 （2）紫外分光光度计 （3）冰浴或冰箱 ?（4）离心机 ?（5）离心管（10mL） ?（6）烧杯（10mL） ?（7）容量瓶（50mL、100mL） ?（8）移液管（0.5ml、2mL 和5mL）（9）药品勺和玻璃棒 ?（10）试管和试管架。 3．试剂 ：（1）5%~6%氨水：用25%~30％氨水稀释5 倍。 ?（2）钼酸铵-过氯酸试剂：取3.6mL