哺乳动物胚胎细胞核移植.PDF

维普资讯 7 一 6 38 黑龙江畜牧兽医 1994年第 1期 哺乳动物胚胎细胞 核移植 柏学进 量雅娟 黄忠牧 (黑龙江省畜牧研 专所 ·齐齐哈尔 ·161014) 陈晓华 ，熙龙江省畜牧 医学校) ● _ _ _ - _ — - ● 58：q·’ ■ 摘 要 本文介绍了哺乳动物B嘲 细胞拔移值技术． 侦产犊牢低7 ．以拔移缸珏{；为供核胚生产的拔移侦妊 对供校B圈厅的来源、受校卵的来萱l[、校移胚值的方法、校 娠率为 29 ．以冷冻的校移植庄E丑fI为供核J1．B生产的拔移 移胎融合后的培养以及棱移值的前景等方蕊进行了综 植胚{If；移植妊娠率为 l3 ． 述关键·调 ~／塑√ 、，， 2 受核卵的来源 ’_-—●_一 _—●_一●-… 盟 旦 受核卵可来源于①手术法回收排出的成熟卵 哺乳动物胚胎细胞核移植．是将哺乳动物早 母细胞(或原核期～2细胞期胚)I@从屠宰动物 期胚胎分离成单个细胞．把每个细胞球或细胞核 卵巢的卵泡中回收卵母细胞．进行体外培养l前者 移入预先去核的卵子 (或去核的原核期～2细胞 费时费用也高．但卵母细胞的质量较好I后者是一 期受精卵)内．使这些受核卵发育成胚胎．然后移 个非常廉价且来源充足而稳定的途径 ．但Prather 植给受体 ．获得子代的生物技术．通过核移植可从 等人指出．体外成熟的卵母细胞较难与移入的核 单个胚胎得到数个甚至无数个无性繁殖同质个 发生融合．既使融合。发育至桑胚或囊肛的能力也 体．与胚胎分割和体外受精相比．不仅能降低胚胎 较弱tl青柳敬人等试验证实．卵母细胞体外培养 的生产成本．扩大胚源．而且可成批生产具有相同 (成熟)时问不同，影响核移核后的融台率和分裂 基因型的动物．加快畜群品质改良． 率 ． 自lllmem~．e等(1981)用胚胎细胞核直接注入 3 核移植 法获得核移植小鼠以来．至今已在绵羊(wllladsen． 3．1 细胞核直接注人法(Ulimezxsc~方法) 1986)牛(Prather等．1987)、家免(Stl~等．1988)、 即用玻璃微吸管把供核胚的细胞核直接注入 猪 (Prather等．1989)、山羊(张涌等．1991)等哺乳 到受核卵的细胞质中，同时吸出受核卵的细胞拔． 动物获得了核移植后代、我国已在山羊、免(杜淼． 此法在显微操作过程中极易损坏受俊卵的细胞核 1991)得到后代．少数国家已将这一技术甩于生 和细胞质，成功率最高为30 --40 ． 产 ． 3．2 融合法 1 供核胚胎的来源 3．2．1 去核前处理将受核卵置于含 0．3 (或 供核胚可通过超数排卵和体外受精获得任一 Ipg／m1)透明质酸酶PBS将受核卵卯丘细胞消化 发育阶段的胚胎．供核胚在8．-32细胞期分离单 掉或用吸管吹打卯母细胞．使颗粒细胞全部脱落． 个卵裂球相对容易且效率较高。随着胚胎发育．卵 然后移入含有细胞松弛素B(5～10微克／毫升有 裂球问的连结更加紧密。分离变得比较困难．效率 的加秋水仙胺0．1～0．3微克／毫升)培养液中，放 降低．所以具有较多细胞的