线粒体和过氧化物酶体71线粒体的形态结构1850年德国.DOCVIP

第七章 线粒体和过氧化物酶体 7.1 线粒体的形态结构 　1850年，德国生物学家Rudolph K?lliker第一系统的研究了线粒体。(肌细胞) 1900年，Leonor Michaelis 氧化还原反应　 1943年，Arbert Claude　采用盐法分离技术分离到线粒体　 1948年George Hogeboom等采用蔗糖介质分离有活性的线粒体，确定了能量转换的部位。 　　逐步证明了线粒体具有Krebs循环、电子传递、氧化磷酸化的作用，从而证明了线粒体是真核生物进行能量转换的主要部位。 7.2 线粒体结构与化学组成 线粒体膜通透性实验 将线粒体放在100 mM蔗糖溶液中，蔗糖穿过外膜进入线粒体的膜间间隙；然后将线粒体取出测定线粒体内部蔗糖的平均浓度，结果只有50 mM， 比环境中蔗糖的浓度低。据此推测:线粒体外膜对蔗糖是通透的，而内膜对蔗糖是不通透的。 线粒体组分的分离 首先将线粒体置于低渗溶液中使外膜破裂，此时线粒体内膜和基质(线粒体质)仍结合在一起，通过离心可将线粒体质分离。用去垢剂毛地黄皂苷处理线粒体质，破坏线粒体内膜，释放线粒体基质，破裂的内膜重新闭合形成小泡，其表面有F1颗粒。 1. 外膜(outer menbrane) 标志酶:单胺氧化酶; 外膜含有较大的通道蛋白:孔蛋白; 2. 内膜(inner membrane) 线粒体进行电子传递和氧化磷酸化的部位，通透性差; 含有大量的心磷脂(cardiolipin)， 心磷脂与离子的不可渗透性有关; 内膜的标志酶：细胞色素氧化酶; 按作用分3类酶：运输酶类、合成酶类、电子传递合成和ATP合成的酶类。3. 膜间隙(intermenbrane space) 标志酶：腺苷酸激酶 　 功能：建立电化学梯度 4. 线粒体基质(matrix) 标志酶：苹果酸脱氢酶 功能：进行氧化反应，主要是三羧酸循环 7.3 前导肽与线粒体蛋白定位 线粒体各部分的蛋白质来自何方?定位机理如何? 7.3.1 前导肽(leading peptide) 蛋白质的两种运输方式：细胞质中的核糖体在合成蛋白质时有两种可能的存在状态： 游离核糖体(free ribosome)：在蛋白质合成的全过程一直保持游离状态 膜结合核糖体(membranous ribosomes)：核糖体在合成蛋白质的初始阶段处于自由状态，但是随着肽链的合成核糖体被引导到内质网上与内质网结合在一起 1. 蛋白质的两种运输方式 A翻译后转运：游离核糖体上合成的蛋白质释放到胞质溶胶后被运送到不同的部位， 即先合成，后运输。在合成释放之后需要自己寻找目的地，又称为蛋白质寻靶。 B共翻译转运：膜结合核糖体上合成的蛋白质通过定位信号，一边翻译，一边进入内质网，在翻译的同时进行转运定位，通过信号肽，经过连续的膜系统转运分选才能到达最终的目的地，称为蛋白质分选。 2. 前导肽与信号肽 A前导肽(leading peptide)：将游离核糖体上合成的蛋白质的N-端信号称为导向信号，或导向序列，由于这一段序列是氨基酸组成的肽，所以又称为转运肽。 B信号肽(signal peptide)：将膜结合核糖体上合成的蛋白质的N-端的序列称为信号序列，将组成该序列的肽称为信号肽 线粒体前导肽的性质： A 长约20-80个氨基酸，通常带正电荷的碱性氨基酸(特别是精氨酸和赖氨酸)含量较为丰富; 序列中不含有或基本不含有带负电荷的酸性氨基酸，并且有形成两性(既亲水又疏水)α螺旋的倾向。有利于穿过线粒体的双层膜。 B 需要消耗能量; C 需要分子伴侣。 D前导肽的特异性： ①具有细胞结构的特异性　 ②前导肽的不同片段含有不同的信息 双导向序列：两个导向序列，位于N端最前面的为基质导向序列，其后还有第二个导向序列，即膜间隙导向序列，功能是将蛋白质定位于内膜或膜间隙 如何证明前导肽引导蛋白质进入线粒体? 实验设计： ①　分离线粒体 ②　与具有线粒体基质定位信号的前体蛋白温育 ③　胰蛋白酶处理 7.3.2 线粒体蛋白定位 1. 线粒体基质蛋白定位 前体蛋白在游离核糖体合成释放之后，在细胞质分子伴侣Hsp70的帮助下解折叠， 然后通过N-端的转运肽同线粒体外膜上的受体蛋白识别， 并在受体(或附近)的内外膜接触点(contact site)处利用ATP水解产生的能量进入转运蛋白的运输通道， 然后由电化学梯度驱动穿过内膜，进入线粒体基质 在基质中， 由线粒体分子伴侣Hsp70(mHsp70)继续维持前体蛋白的解折叠状态。 接着在Hsp60的帮助下， 进行正确折叠， 最后由转运肽酶切除导向序列，成为成熟的线粒体基质蛋白。 2. 线粒体膜间间隙蛋白的转运 定位需要两个导向序列，基质导向序列和膜间隙导向序列。这类蛋