分布泥塘泥鳅LDH同工酶电泳图谱特征的研究.docVIP

分布泥塘泥鳅LDH同工酶电泳图谱特征的研究 安徽农业大学,1997,24(1):68—72 JournalofAahuiAgriculturalUniversity 分布泥塘泥鳅 9— 一// LDH 电泳图谱特征的研究 查堡垒:杨启超陆依群●/ (安徽农业大学畜牧水产学院,合肥230036) 摘要应用聚丙烯酰胺凝肢垂直板电泳(PAGE)分离和研完成体泥鳅心肌,骨骼肌, 肝脏,卵巢,脑,眼,血清七种组织器官中的LDH同工醇.蛄果表明,在电泳图谱负极端的 相同部位,骨骼肌出现5务,肝脏有4务.脑组织1务LDH同工醇区带}其余多数组织中均 为3务醇区带F此外,近负极端,肝脏组织还有l务其他组织所没有的LDH同工酶区带.这 提示了泥鳅的LDH同工酶可能是由LdhA,LdhB和LdhC3十基因座位蝙码的A,B,c亚 基组合成的四聚体.定量分析表明LDH同工醇活力具有明显的组织特异性t血清,卵巢,肝 鐾薪净虹fIj7/关键词JI皇L婪旦苎生聚体杉卜隐J\—/分类号Q554.9 乳酸脱氢酶(LacticDehydrogenase,LDH)是1种参与糖代谢的重要酶J,广泛分布 于心脏,肌肉,肝脏,卵巢,脑,眼等各组织细胞.由于LDH同工酶的生成受代谢产物 的反馈抑制和遗传基因编码的双重控制.因而在电泳图谱上表现出种属和组织器官的特 异性.作者曾分析研究了分布稻田的3种体色不同泥鳅LDH同工酶?发现它们具有相同 的电泳图谱和分布的组织特征(详见另文).在其后的研究中.发现1种分布于泥塘的泥 鳅.不仅体色不同于分布稻田的泥鳅.而且它们的LDH同工酶电泳图谱也存在明显差 异.鱼类LDH同工酶是研究鱼种的遗传结构的重要依据.为在泥鳅的遗传育种.饲养繁 殖等方面进一步开展研究工作.本文分析比较了这种分布在泥塘的泥鳅的LDH同工酶. 1材料和方法 1.1泥鳅血清及组织酶液的制备 实验用泥鳅取白合肥市场,共计200尾,体长5～15cm.将断尾获得的血置室温约 2h;取析出的血清备用.在冰浴条件下.取肝脏,骨骼肌,心肌,卵巢,脑和眼组织各0. 1g.分别加1.Oral冰冷的0.02M.pH7.0PBS匀浆,于4℃条件下,10,O00rpm离心 10min,取上清液作组织酶液电泳用. 1.2电泳方法 朱翠兰,女,1964年生,硕士,讲师.收稿日期:199510—18 24巷1期朱翠兰等分布泥塘泥鳅LDH同工酶电泳图谱特征的研究69 聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳(polyacrylamidegelelectrophoresis,PAGE)0,分离胶 5.O,浓缩胶2.5.电极缓冲液为pH8.3的Tris--Gly,在4℃下12.5mA/cm电泳4h. 1.3LDH同工酶染色 染色按Dietz等方法. 1.4摄影和放大 摄影和放大见傅文瑜0方法. 1.5酶谱的记录 染色后的凝胶用日本岛津cs一930扫描仪扫描,打印并计算出图谱和各酶带的相对 百分含量 2结果 2.1分布泥塘泥鳅七种组织LDH酶的电泳图谱 在PAGE中出现的泥鳅LDH同工酶电泳图谱如图1所示:从正极端到负极端,依次 为LDH.,LDH2,LDH3,LDH,LDH5和cLDH.在血清,眼,卵巢,肝脏和心肌组织 表现出LDH3,LDH,LDH53条区带;脑和骨骼肌分别有LDH51条和LDH1～LDH55条 区带.此外,在肝脏组织的电泳图谱中在负极端还存在cLDH带. ㈣ 图laLDH同工酶电泳图图IbLDH同工酶电泳模 FigurelaTheelectrophoreticmapsofLDHisoen—Figure1bTheelectrophoreticmodelmapsofLDH zymesisOenzymes 图1泥鳅不同组织的LDH同工酶电泳图 Figure1TheelectrophoreticmodlemapsofLDHisoenzymesindifferenttissuesoftheOphiocephalusat— gus 1一心肌,2?骨骼肌,3肝脏,4卵巢,5脑,6?眼,7?血清 1.skeletalmtJsc]e2.cardiacmusc|e,3.1ler,4.ovary,5.brain,6.eye,7serum 2.2七种组织LDH同工酶活力的测定 为确定和分析七种组织中LDH同工酶的分布特点和相对活力,应用薄板扫描仪进 行了扫描测定.结果如图2所示:与电泳图谱相对应,在多数组织中如在血清,眼,卵巢 和心肌组织表现出为3个峰带,脑,肝脏和骨骼肌分别为1个,4个和5个峰带. 有意义的是,与分布于稻田的泥鳅的LDH同工酶的组织特异性和分布不同,在血 清,脑和心肌中,稻田泥鳅在这些组织中以LDH.或LDHs活力最高,而泥塘泥鳅则均以 ●簟 ● l 擘,鸢 安徽农业大学 LDH活力最高.此外.在肝