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医学细胞生物学-细胞增殖
Rod-Shaped Bacterium, E. coli, dividing by binary fission (TEM x92,750). 细胞周期是一个相当复杂的过程, 不同类型的细胞周期持续的时间不完全相同, 而且,细胞的分裂状态也各有异。 根据光学显微镜所观察到的细胞分裂时的活动, 将细胞周期分为两个主要的时期: M期(M phase)和分裂间期(interphase)。 分裂间期是指上一次有丝分裂的终了到本次有丝分裂的开始时间间隔,因此间期包括G1期,S期和G2期。 M期包括细胞的核分裂和胞质分裂两个过程。 在核分裂的过程中, 复制的染色体被分到两个细胞核中, 胞质分裂则是将整个细胞一分为二, 形成两个子细胞。 G0期是指细胞分裂后相对稳定的一段时期,也称为静止期(resting or quiescent phase)。G0不包括在细胞周期之内。 细胞周期的长短随细胞的种类而异,短的仅为数小时,长的则可达几十年。细胞周期的长短主要取决于是否进入G0期,且G0期有多长。 某些不进入G0期的细胞,G1期仅数小时,因而整个细胞周期也较短;而像神经细胞这样的“不育细胞”,其G0期可长达几十年,甚至与整体的生命相伴随,常有人说脑细胞死一个便少一个,即是依据上述道理。 细胞周期同步化 细胞同步化(synchronization):是指在自然过程中发生 或经人为处理造成的细胞周期同步化,前者称自然同步化,后者称为人工同步化。 自然同步化: 一种粘菌的变形体plasmodia:如粘菌只进行核分裂,而不发生胞质分裂,形成多核体。数量众多的核处于同一细胞质中,进行同步化分裂,使细胞核达108,体积达5~6cm。疟原虫也具有类似的情况。 人工同步化 有丝分裂选择法: 使单层培养的细胞处于对数增殖期,此时分裂活跃,其中处于有丝分裂M期的细胞变圆隆起,与培养皿的附着性低,此时轻轻振荡,M期细胞脱离器壁,悬浮于培养液中,收集培养液,再加入新鲜培养液,依法继续收集,则可获得一定数量的中期细胞。其优点是,操作简单,同步化程度高,细胞不受药物伤害,缺点是获得的细胞数量较少。 密度梯度离心法: 不同时期的细胞体积不同,而细胞在给定离心场中沉降的速度与其半径的平方成正比,因此可用离心的方法分离。其优点是可用于任何悬浮培养的细胞,缺点是同步化程度较低。 药物诱导法 DNA合成阻断法 选用DNA合成的抑制剂,可逆地抑制DNA合成,而不影响其他时期细胞的运转,最终可将细胞群阻断在S期或G/S交界处。5-氟脱氧尿嘧啶、羟基脲、阿糖胞苷、氨甲蝶呤、高浓度ADR、GDR和TDR,均可抑制DNA合成使细胞同步化。优点是同步化程度高,适用于任何培养体系。可将几乎所有的细胞同步化。缺点是产生非均衡生长,个别细胞体积增大。 分裂中期阻断法 通过抑制微管聚合来抑制细胞分裂器的形成,将细胞阻断在细胞分裂中期。优点是操作简便,效率高。缺点是这些药物的毒性相对较大。 细胞周期各时相的动态及特点 (一)分裂间期 G1期 (1)为S期DNA合成作物质、能量准备; (2)具有控制点(R点):指细胞在周期运行的 过程中所具有的控制点,以调节细胞是 继续沿周期运行,还是停止于某一阶段 (3)染色质处于复制前感受态状态 (4)进行DNA损伤修复的检验 (5)对药物等理化因素作用的敏感 (6)不同类型细胞时间变化最大 S期 (1)DNA复制 (2)组蛋白和非组蛋白合成 (3)染色质的装配 (4)中心粒复制 G2期 细胞进入有丝分裂的准备阶段。 (1)染色质螺旋化,产生凝集 (2)合成与有丝分裂有关的特殊蛋白质,如微管蛋白 (3)合成使核膜解体的可溶性因子 (4)合成促使细胞从G2期进入M期的可溶性蛋白激酶 (5)具有控制点(R点) (二)有丝分裂期 特点: (1) 形成有丝分裂器 (2) 细胞核产生一系列复杂的形态变化 (3) 由核分裂和胞质分裂组成,是一个连续的 分裂过程 (4) 时间最短,形态变化最大 (1)染色质形成染色体,每条染色体含两条姊妹染色单体 (2)核膨大 (3)分裂极确定 (4)核仁解体 (5)核膜消失 (1) 纺锤体形成 (2) 有丝分裂器形成 (3) 染色体向赤道面运动和排列 (4)中期染色体结构典型,清晰可数,适合作分析 与有丝分裂相关的亚细胞器 1.中心粒(cenreosome) 每个中心粒为一圆筒状结构,筒壁是三联微管 进入M期之前进行了复制,形成两对中心粒 2.着丝粒(centromere) 着丝粒是指染色体主缢痕部位的染色质 3.动粒 动
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