培养大鼠海马脑片模拟痫性发作后pcREB在细胞-重庆医科大学学报.PDF

重庆医科大学学报２０１２年第３７卷第４期 （ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ２０１２．Ｖｏｌ．３７Ｎｏ．４） — ２８９— 基础研究　ＤＯＩ：１０．３９６９?ｊ．ｉｓｓｎ２０１２．０４．００１ 培养大鼠海马脑片模拟痫性发作后 ｐＣＲＥＢ 在细胞凋亡中的作用的初步研究 何志慧，蒋　莉，陈恒胜，张晓萍 （重庆医科大学附属儿童医院神经内科，重庆　４０００１４） 【摘　要】目的：观察痫性发作对体外培养海马脑片的损伤作用，研究细胞磷酸化 ｃＡＭＰ反应元件结合蛋白（Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ ｃＡＭＰｒｅｓｐｏｎｓｅｅｌｅｍｅｎｔｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ｐＣＲＥＢ）对损伤海马神经元的作用。方法：以培养 １１ｄ的海马脑片为研究对象，随机分 为３组：（１）正常对照组：正常海马脑片培养液培养至１４ｄ。（２）痫性发作模型组：正常海马脑片培养液培养至１４ｄ，更换为含 匹罗卡品（０．５ｍｍｏｌ?Ｌ）的完全培养液作用１ｈ后终止培养。（３）抗 ｐＣＲＥＢ抗体干预组：用含ｐＣＲＥＢ抗体的海马脑片培养液 （ｐＣＲＥＢ抗体终浓度为５ ｇ?ｍｌ）预培养３ｄ，换为含匹罗卡品（０．５ｍｍｏｌ?Ｌ）的完全培养液作用 １ｈ后终止培养。采用ＴＵＮＥＬ μ 原位末端标记法检测各组培养海马脑片凋亡细胞；免疫组化染色观察海马脑片神经元内ｐＣＲＥＢ蛋白的表达变化。结果：（１） 痫性发作模型组：海马脑片ＣＡ１区发生凋亡的细胞（９５．４４±１４．３０）显著多于对照组（４１．３０±９．３０）（Ｐ＜０．０５）；ｐＣＲＥＢ表达 （２０１３６±１９．３１）较对照组（７５．１２±１３．７１）显著升高（Ｐ＜０．０５）。（２）抗ｐＣＲＥＢ抗体干预组：海马脑片ＣＡ１区发生凋亡的细 胞（１４０．８８±１８．３２）较痫性发作模型组显著增多（Ｐ＜０．０５）；ｐＣＲＥＢ表达（１７２．６０±１７．６８）较对照组显著升高、较模型组显著 降低（Ｐ＜０．０５）。结论：（１）痫性发作可以增加体外培养海马脑片神经细胞凋亡发生，加重神经元损伤。（２）痫性发作后海马 脑片神经细胞ＣＲＥＢ的磷酸化增强，阻断ＣＲＥＢ的磷酸化可导致神经细胞凋亡加重。 【关键词】ｐＣＲＥＢ；海马脑片；痫性发作；凋亡 【中国图书分类法分类号】Ｒ３２９．２８ 【文献标志码】Ａ 【收稿日期 ＥｆｆｅｃｔｏｆｐＣＲＥＢｏｎｔｈｅａｐｏｔｏｓｉｓｏｆｎｅｕｒｏｎｓｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｓｌｉｃｅｓａｆｔｅｒｓｅｉｚｕｒｅｌｉｋｅａｃｔｉｖｉｔｙ ＨＥＺｈｉｈｕｉ，ＪＩＡＮＧＬｉ，ＣＨＥＮＧＨｅｎｇｓｈｅｎｇ，ＺＨＡＮＧＸｉａｏｐｉｎｇ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｌｏｇｙ，Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ） 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｓｅｉｚｕｒｅｌｉｋｅａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｐＣＲＥＢｏｎｔｈｅｎｅｕｒｏｎｓｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｓｌｉｃｅｓｉｎｖｉｔｒｏ． Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｓｌｉｃｅｃｕｌｔｕｒｅｄｆｏｒ１１ｄａｙｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ３ｇｒｏｕｐｓ：（１）ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ：ｃｕｌｔｕｒｅｄｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｓｌｉｃｅｓ ｗｅｒｅｅｘｐｏｓｅｄｔｏｒｅｇｕｌａｒｍｅｄｉａｔｏ１４ｄ．（２）ｓｅｉｚｕｒｅｌｉｋｅａｃｔｉｖｉｔｙｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ：ｃｕｌｔｕｒｅｄｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｓｌｉｃｅｓｗｅｒｅｅｘｐｏｓｅｄｔｏｒｅｇｕｌａｒｍｅｄｉａ ｔｏ１４ｄ，ｔｈｅｎｒｅｔｕｒｎｅｄｔｏｒｅｇｕｌａｒｍｅｄｉａｗｉｔｈｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ（ｆｉｎａｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ：５ｍｍｏｌ?Ｌ）ｆｏｒａｎｏｔｈｅｒ１ｈ．（３）ａｎｔｉｐＣＲＥＢａｎｔｉｂｏｄｙｔｒｅａ ｔｅｄｇｒｏｕｐ：ｃｕｌｔｕｒｅｄｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｓｌｉｃｅｓｗｅｒｅｐｒｅｃｕｌｔ