GenEscortTMⅠ使用说明书.PDFVIP

南京慧基生物技术有限公司 GenEscortTM Ⅰ使用说明书 一．产品介绍 GenEscortTMI 是针对一些常用贴壁细胞设计的经济型产品，该试剂由一种不可降解的分 枝状 PEI 衍生物与其它组分复合而成。对绝大多数贴壁细胞系具有较高的转染效率，特别适 用于各种常规细胞如 293，CHO，COS，A549，LLC，B16F10 等细胞的转染。可进行寡核苷酸 和 siRNA 运送。也能用于体内的动物实验。 TM GenEscort I 与传统的脂质体相比无论在转染效果和实验操作上都有明显的优势，主要 表现为： 经济实惠，适用于大多数常用的贴壁细胞系。 转染效率高，细胞毒性低。 使用较少的 DNA 量即可获得高的转染效率。 培养基可含或不含血清，可以用 PBS 或不含血清的培养基稀释 DNA 进行转染，转 染过程中不需换液。 转染方法操作简单，转染过程快速。 转染的重复性好，可进行寡核苷酸和 siRNA 运送。 需要较少的转染条件优化 二．运输与储存 运输：常温 储存：2 －8℃ 一年； －15℃ 至―20 ℃ 二年以上 三．转染前的准备与注意事项 1 ．细胞接种 为了取得较高的转染效率，推荐使用在 50 代以内的细胞进行转染实验。要求在转染前 24 小时对细胞再次传代，在培养基中加入抗生素对转染效果没有影响。转染时细胞密度一 般应为 60-80%，但这因细胞株的不同而变化，对最常用的细胞株建议细胞密度为 70-90%。 以 24 孔板的转染为例，最理想条件是在转染前 24 小时，每孔接种(500 µl )0.5 －2×105 个细 胞。在大多数情况下，如果在细胞贴壁后(接种几小时后)即进行转染，也可以得到相近的结 果。表 1 列举了不同细胞培养装置的推荐细胞数量。 2 ．DNA 的质量 为了取得较高的转染效率，推荐使用高纯度的质粒。仅仅根据 DNA 电泳条带的情况估 计 DNA 的量和纯度是不够准确的。建议对提取的质粒DNA 的量和纯度进行检测，DNA 含 量 (μg/mL)=50 × (260 nm 的读数) × 稀释倍数，通过检测质粒 DNA 在 260nm 和 280nm 的 OD 值的比值（OD260/OD280 ）估计核酸的纯度，OD260/OD280 值应该≥1.8。转染时不同 品质的DNA 用量不同，以 24 孔板转染为例，使用酚氯仿沉淀法提取的质粒 DNA 一般每孔 需要加入≥2μg 质粒 DNA ，而使用 Qiagen 分离柱或类似方法提取的质粒 DNA 一般每孔需要 慧基生物、转染利器 T o s t r e n g t h e n y o u r r e s e a r c h c a p a b i l i t i e s a n d t o f a c i l i t a t e i n n o v a t i o n 电话：+86 25；传真：+86 25 南京慧基生物技术有限公司 加入 0.5-1μg 质粒 DNA 。 表 1 不同细胞培养装置转染前一天细胞接种的推荐细胞数量 每装置面积 细胞培养液总体积 细胞培养装置 接种细胞数量 2 （cm /孔或皿） （每孔或每皿）* 96 孔板 10 000 - 30 000 0.3 0.1 ml - 0.2 ml 48 孔板 30 000 - 80 000 1 0.25 ml