掌握配制培养基的一般方法和步骤内容1.PPTVIP

啤酒酵母的菌落 红酵母的菌落 各种酵母菌的菌落 酵母菌的细胞形态 酵母菌的细胞形态 大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似，但比细菌菌落大而厚，菌落表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。 2、个体形态与出芽生殖 用水浸片法观察，根据酵母菌是否染上兰色可以区别细胞的死活（这里的利用美蓝是一种弱的氧化剂，还原后变为无色的特性，活细胞具有还原力，故将其还原 变为无色）。 酵母菌的芽殖过程 1．泡；2．小管；3．核；4．液泡 3、裂殖酵母的观察：用水浸片法观察。 酵母菌子囊孢子的形成过程 1、2、3、4：两个细胞结合；5：接合子；6、7、8、9：核分裂；10、11：核形成孢子 酵母菌假菌丝的形成 图中1、2、3、4 ······· 是出芽的顺序 * * 环境微生物学实验 工艺学院 一、实验教学目标基本与要求 1、明确培养基的配制原理。 2、掌握配制培养基的一般方法和步骤。 二、实验内容 1、介绍培养基的配制原理和方法步骤 2、动手称量试剂、配制牛肉蛋白胨培养基等。 实验一 培养基的制备 称量--配置--调节pH值--过滤--分装--灭菌1.称量 按照培养基配方，准确称量各成份放于烧杯中。对于不是粉状（如肉膏），应用烧杯称量。 三、培养基的制备过程 2.配调 向烧杯中加入适量的水，搅拌，使其溶解（可加热助溶）。 如是配制固体培养基，在琼脂的熔化时，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。 如果配方中含有淀粉，先将淀粉用少量冷水调成糊状并在火上加热搅拌，然后加足水分及其他药品，待完全熔化后补足所失水分。 3.调节pH值 培养基溶解均匀并冷却至室温时用pH试纸测pH，然后根据要求加酸或碱（一般用1molHcl和1molNaOH），要缓慢少量且多加搅拌。培养基配方为自然pH时，不用调节。  4.过滤 用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。  5.分装 将制好的培养基分装入试管内或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。固体培养基要趁热装。 分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污染。分装量可分为下面几方面：（1）斜面：装量为管长的1/4-1/5。（2）液体培养基、高层培养基、半固体培养基：装载量不超过管长的1/3。（3）三角瓶：装量不超过容积1/2。 6.灭菌 塞棉塞，包扎，灭菌。 高压蒸汽灭菌法：是在密闭的加压容器内进行，加热使器内的水产生蒸汽，由于密闭，增加了器内的压力，使水的沸点升高，从而获得高于100度的蒸汽温度。 四、实验报告 记录本实验配制培养基的名称、数量，并图解说明其配制过程，指明要点。 五、问题和思考 l．配制培养基有哪几个步骤?在操作过程中应注意些什么问题?为什么? 2．培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌?若不能及时灭菌应如何处理?已灭菌的培养基如何进行无菌检查? 实验二 消毒与灭菌 一、实验教学目标与基本要求 了解消毒和灭菌的原理，掌握各种灭菌方法的操作步骤。 二、实验内容： 1．干热灭菌法 2．高压蒸汽灭菌 3．紫外线灭菌法 三、实验步骤 （一）干热灭菌法 1、原理 利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 所需温度(160-170℃)，时间长(1-2h)。 注：干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。 2、步骤 恒温 降温 开箱取物 升温 装入待灭菌物品 （二）高压蒸汽灭菌 1、原理 利用加热一个密闭的加压灭菌锅，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 一般培养基用0.1Mpa，121.5℃,15～30min 2、步骤 加水 装待灭 菌物品 加盖 加热 灭菌时间到后 断电源 压力降为零 开箱取物 （三）紫外线灭菌法 1、原理 紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA 链的交联，从而抑制了DNA 的复制。另一方面，由于辐射能使空气中的氧电离成[O]，再使O2 氧化生成臭氧或使水氧化生成H2O2。O3 和H2O2 均有杀菌作用。 适用于无菌室，接种箱，手术室内的空气及物体表面的灭菌。 2、步骤 1）单用紫外灯 在无菌室内或在接种箱内打开紫外线灯开关，照射30min，将开关关闭。 2）化学消毒剂与紫外线照射结合使用 在无菌室