虹鳟VGR重链恒定区的表达及兔抗血清的制备-水产学报.PDF

第 卷第 期 水 产 学 报 年 月 文章编号 虹鳟 重链恒定区的表达及兔抗血清的制备 赵景壮 徐黎明 刘 淼 曹永生 尹家胜 刘红柏 卢彤岩 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所黑龙江 哈尔滨 摘要 为了能够成功表达虹鳟 本研究利用生物信息学软件对虹鳟 的亲水性及抗 原性进行了分析根据 收录的虹鳟 重链恒定区参照生物信息学分析结果设 计用于扩增截短的 基因的引物以虹鳟头肾 提取物为模板利用 方法扩 增虹鳟截短的 重链恒定区部分基因片段连接原核表达载体 利用大肠杆菌 进行表达 及 结果显示纯化后截短的 大小约为 且 纯度达到 利用其制备兔抗血清后 分析结果显示所制备的兔抗血清与本研 究所表达的截短 蛋白的反应效价为 与虹鳟血清提取的全长 反应效价为 并且呈现出抗原计量依赖性 研究表明重组 蛋白与虹鳟血清中的天然 重链恒定区具有近似的结构利用其所制备的兔抗血清能够与虹鳟鱼体中的天然 发生 特异性反应 关键词 虹鳟 基因克隆 抗血清 中图分类号 文献标志码 虹鳟 属于鲑科鱼类 重链恒定区片段并利用纯化的重组 蛋白制 原产于北美洲太平洋沿岸美国加州山涧中 备兔抗血清以期为虹鳟免疫系统免疫机制研究 年引入中国 经过几十年的驯化饲养后现在 及相关免疫检测提供基础 已经成为广泛的养殖品种之一 但是随着虹鳟 材料与方法 养殖规模的扩大病害问题已严重困扰其养殖业 的发展近年来关于虹鳟免疫系统的研究受到了 实验材料 学术界的广泛关注 实验虹鳟来源于黑龙江水产研究所渤海冷水 抗体是脊椎动物的免疫系统在抗原的刺激下 性鱼类试验站所养殖的美国品系体质量 由淋巴细胞所产生的可与相应的抗原发生特异性 虹鳟血清提取 由美国清泉食品公司 结合的免疫球蛋白 鱼类虽然是低等的脊椎动 博士惠赠质粒提取试剂盒胶回收 物但是其免疫系统同样可以产生不同类型的免疫 试剂盒均购自天根生化科技北京有限公司克 球蛋 白如 等其中 隆载体 购自宝生物工程 大连 是鱼类特异性免疫中最主要的免疫球蛋白 有限公司 连接酶 聚合酶限制性核 哺乳动物的 以五聚体存在而鱼类的 多 酸内切酶 异丙基硫代半乳糖苷 购 以四聚体的形式存在 它由 条轻链链和 自公司弗氏完全佐剂弗氏不完全佐剂 条重链链所组成的单体通过连接链 将 购自公司标记的羊抗兔 购 自 个单体连接成一个四聚体分子量为