中国南海红树林内生真菌ZZ42次级代谢产物的研究.pptVIP

中国南海红树林内生真菌ZZF42次级代谢产物的研究 报告人：吴春燕 学号专业：应用化学（化学生物学） 导师：刘岚 副教授 报告提纲 选题意义 国内外研究现状 研究思路 实验及讨论 结论 选题意义 研究思路 关于培养液中代谢产物的讨论 PE:EA=1∶2 （体积比） 洗脱得到的组分经反复柱层析、薄层制备色谱纯化，得到: EI-MS 1H NMR分析（溶于氘代DMSO） 如果真的存在环（苯丙-酪）二肽， 它为什么不能被EI检测出来？ EI源要求固、液态样品汽化后再进入离子源，因此不适合难挥发和热不稳定的样品。 APCI-MS2 结 论 关于菌体代谢产物中低极性部分的讨论 结 论 红树林内生真菌ZZF42菌体的低极性代谢产物甲酯化后含有八种成分，分别为：α-柏木烯、十四酸甲酯、十五酸甲酯、(9Z)-十六碳烯酸甲酯、十六酸甲酯、（9E，12E）-十八二烯酸甲酯、(9Z)-十八烯酸甲酯、十八酸甲酯。 一般认为，低极性部分 = 脂肪酸/脂肪酸酯 致 谢 本论文是在导师刘岚副教授的悉心指导下完成的。刘老师对实验进展十分关注，从理论上和实践上给予了我非常深入细致的教导。是刘老师的信任和支持使我有了许多锻炼的机会，从学习灭菌接菌、过柱分离到核磁培训、测试、解谱，是刘老师的精心栽培使我的实验技术和科学素养都上升到一个新的高度。刘老师拥有渊博的专业知识，严谨的治学态度和勤奋踏实的科研作风，是我将来学习工作中的楷模。在此，衷心感谢刘老师对我的谆谆教诲和深切关怀！ 感谢林永成教授，佘志刚副教授，许芳师姐，马欢歌师姐，杨昌师兄，高俊平师兄，陈彬师兄，何永钊同学，王锋同学给予我的帮助，感谢天然室所有老师、师兄师姐、同学们对我的关心和帮助！ 本论文的大部分谱图是由中山大学测试中心的陆慧宁、周海云、姚骏骅老师完成的，在此对他们表示衷心的感谢。同时还要感谢学院中心实验室胡谷平老师的指导和帮助！ 本论文的研究得到第八届（2007学年）创新化学实验与研究基金项目的支持，在此表示感谢！ 感谢“创新化学实验与研究基金” 及在场的所有老师和同学们！ 其 它 * * 海洋真菌是海洋微生物的一个重要分支。从海洋真菌分离出的次级代谢物中约70％－80％具有生物活性。 红树林内生真菌代谢产物包括生物碱类 (杂环生物碱、大环生物碱等)，大环内酯，环肽类，醌类，萜类，聚醚类，甾醇类，多糖类，不饱和脂肪酸等。 从红树林内生真菌ZZF42已发现的代谢产物： 1-甲基-β-咔啉 N-甲基-1-甲基-β-咔啉 吲哚-3-乙酸 4-甲氧基-8-羟基-喹啉 环-（苯丙-酪）二肽 4-羟基-α-苯乙酸 据此可看出，红树林内生真菌F42能产生结构独特、骨架新颖并具有生物活性的代谢产物，而产物中被分离鉴定出的化合物还比较少，故该菌具有进一步研究的潜力。 传 统 途 径 创 新 途 径 微生物大量培养 培养物收获 纯组分 代谢产物分离 结构鉴定 是否新化合物 药理活性测试 混合组分 时间长，损耗大 组分信息获知 选择好的分离条件纯化 MS GC-MS 培养菌种 配制培养液200L 接菌 发酵40天 收菌 菌体 晒干 MO浸泡一个月 MO提取物 EA萃取5次 EA提取物 培养液：60℃下200L 5L 前期准备工作 —— 重蒸溶剂、查阅文献等 （07.11——07.12） 实 验 与 讨 论 菌株培养发酵 （08.01——08.03） 分离、鉴定代谢产物 （08.03——08.05） 浅黄色粉末 Rf ≈ 0.25 Rf ≈ 0.70 展开剂：EA 展开剂：10%MO-EA 碘缸显色 RT=1.65s EI-MS: RT=1.65s及RT=2.38s处各存在一个峰 RT=2.38s 环（苯丙-苯丙）二肽 环（甘-苯丙）二肽 δH 9.19(brs) δH 6.81～6.83(d, J=8.1) 6.64～6.67(d, J=8.1) 环（苯丙-酪）二肽：mp 291～293℃ 难挥发化合物 APCI：大气压状态下进行的化学电离 MS2：母离子和子离子的关系 APCI-MS2分离、鉴定 样品的（+）APCI全扫描质谱图 母离子m/z 311.1的二级全扫描质谱图 母离子m/z 295.1的二级全扫描质谱图 母离子m/z 205.1的二级全扫描质谱图 环（苯丙—酪）二肽的裂解途径 混合组分先送质谱分析，可基本确定其成分，再根据个人经验或查阅文献，能找出有效的分离条件（展开体系），如此，既提高效率，又能防止微量成分的损失。 环（苯丙-酪）二肽 环（苯丙-苯丙）二肽 环（甘-苯丙）二肽 菌体：用