《温度、磁场以及切割方法对涡虫再生的影响》-毕业设计论文（学术).docVIP

温度、磁场以及切割方法对涡虫再生的影响 （武汉大学生命科学学院生命科学与技术基地班和病毒班） 摘要：日本三角真涡虫（Dugesia japonica）是一种广泛分布于淡水泉涌、溪流、湖泊和池塘等淡水中的扁形动物，其再生能力十分惊人。本实验采用正交拉丁方设计，系统研究了温度、磁场和切割方法对涡虫再生速度的影响。温度梯度设为15oC、20oC、25oC，磁场由于其强度难以测定，仅设有和无两组。另设切割方法一组。实验结果显示，温度对涡虫再生的影响非常大，而磁场对涡虫再生有较明显的抑制作用，但仍有待进一步定量研究。本实验是对涡虫再生的表观性研究，对进一步深入探讨涡虫的再生和解体机制有重要的指导意义。 关键词：涡虫再生 温度 磁场 . 日本三角涡虫（Dugesia japonica）是广泛分布于我国各淡水水体、特别是山区溪流中常见的涡虫种类之一，具有取材方便、在实验室易培养以及无性横裂生殖速度快等优点，是一种常用的实验动物，在动物再生、干细胞和生殖生物学等研究领域中具有较高的科研价值，另外极强的再生能力使其成为研究胚胎发育和细胞分化的好材料[1]。有文献报道19oC至24oC为涡虫切割再生的适宜温度，其中22oC为最适温度[2]，但未见涡虫在15oC、25oC下的再生情况的报道。另外，资料显示，磁场对生物组织的存在两种截然相反的影响。一方面，磁场能使细胞内电荷运动方向发生改变，从而抑制细胞周期的正常进行，导致细胞分裂停止。另一方面，磁场可促使组织细胞带电粒子的运动，调整生物膜的液晶结构，改变细胞膜的通透性，促进代谢过程，加强组织细胞生长[3]。而磁场对涡虫再生的影响并未见报道，故本实验对磁场对涡虫再生的影响作了初步探讨。总而言之，本实验是对涡虫再生的重要表观研究，对进一步深入研究涡虫再生的机制具有重要意义。 1．材料与方法 1.1 实验材料： 涡虫60只，载玻片5个，培养皿5个，培养涡虫用的大水槽1个，手术刀5个，滴管5个，青霉素瓶11个，体视显微镜，磁铁6个，15℃、20℃、25℃恒温箱各一个，蒸馏水，75%乙醇溶液、煮过的自来水，标签纸 涡虫来源：涡虫采于武汉大学枫园珞珈山脚下的水沟处，采集时间为2009年12月8日下午。 1.2 实验方法： 1.2.1 实验前处理 （1）选择体形较大，体长约10mm的涡虫进行实验（切割处理时间为2009年12月15日）。为防止涡虫进行裂殖，在20℃的纯净水瓶中培养一周后再进行切割。在切割实验前让涡虫禁食一周（禁食时间为2009年12月8日至2009年12月15日），切割后也禁食一周（时间为2009年12月16日至23日）。 （2）实验中涡虫生活的环境始终为放置一天的煮开过的自来水。切割用的手术刀在切割前用75%的乙醇溶液消毒。 1.2.2 切割实验 将体长均约为10mm的涡虫等分为A、B、C、D、E五组，每组3只。用滴管吸取涡虫，将其放在载玻片上，待虫体伸展到最长时，用手术刀在预定的部位进行切割，刀尽量与玻片垂直，切面尽量保持平整。切割过的虫体全部根据切割方式的不同分别用不同的青霉素小瓶盛装，放入20℃恒温箱中进行培养。每天定时观察记录各切口再生的情况。 以不同的切割方式切割涡虫（每三条以相同的切割方式切割）： A组：把涡虫切割成头尾两段。（注意待涡虫向前运动伸长到最长时迅速将刀片向下猛压，再停顿几秒，等头部向前游离刀片时才收刀。） B组：从身体各部分不同处将涡虫切成4段。（切割时，适当改变水滴的形状，可在一定程度上引导涡虫的运动，让其的运动更有规律性，当虫体伸长时，下刀要快速。） C组：沿身体纵轴将虫体切割成左右相同的两半。（涡虫运动太快时，减少载玻片上的水量，使其运动减慢。切割时，等他缩着身子的时候反而更好切。） D组：分别从两侧向下切割身体中段，以及沿身体中线切割头部，但皆不割断。（切割时发现涡虫喜欢游泳，可事先将刀锋与水面略接触，放在虫头部前方。待虫体头部游至刀下后，迅速下压刀片，即可切割头部而不切断。否则，刀片与水面接触时水因表面张力而隆起，会刺激涡虫使其游走。切的尽量深一些，不然一直愈合。） E组： 分别从两侧向上切割身体中段，以及沿身体中线切割尾部，但皆不割断。（尾部切割较容易，待涡虫伸长时下刀即可。切头部下面时，下刀要准，快，不要过猛，以免拦腰斩断。切割两侧时，如果手艺不够精准，就不要切对称，以免切断。切的尽量深一些，不然一直愈合。） 具体切割方法参照图1： 图1 1.2.3温度、磁场对再生的影响实验组 本组实验采用正交拉丁方设计，每组的涡虫切割方式均同上述切割实验中的A组。切割2~3条体长均为10mm的涡虫，分别置于以下不同的环境条件中进行培养： ①无磁场的情况下：1.温度15℃ 2.温度20