人汗腺细胞分离和纯化培养方法探讨.PDFVIP

维普资讯 · 84 · 中国危重病急救医学2005年2月第 17卷第2期 ChinCritCareMed，Feb．2005，Vo1．17，No．2 · 论 著 · 人汗腺细胞的分离和纯化培养方法探讨 周岗 李海红 付小兵 陈伟 韩冰 白晓东 利、同柱 顾绍峰 屈振亮 【摘要】 目的 探讨建立人皮肤汗腺细胞体外分离及纯化培养的技术。方法 通过酶消化法分离人皮 肤汗腺 ，微量加样器在倒置显微镜屏视下吸取游离的汗腺组织移入 Hank平衡盐溶液 (HBSS)，经纯化后予以 原代培养。结果 分离的汗腺可在体外贴壁生长、增殖并传代 ，纯化处理清除了杂质细胞和组织碎片，解决了 成纤维细胞对汗腺细胞培养的污染难题，且汗腺的生长能力无明显改变。结论 人汗腺细胞的培养存在着分 离困难和成纤维细胞污染等难题，采用本方法可以获得大量处于良好生长状态的高纯度人汗腺细胞。 【关键词】 汗腺； 细胞培养； 胶原酶； 原代培养； 细胞纯化 Isolation andpurificationofeccrinesweatglandsinhumanskin ZHOU Gang IIHai—hong FU Xiao— bing，CHEN Wei，HAN Bing，BAIXiao—dong，SUN Tong—zhu，GU Shao—feng，QUZhen—liang． Ke ResearchLaboratoryof WoundRepair，BurnsInstitute，304thClinicalDepartmentofGeneralHospital of尸LA，Beijing 100037，China 【Abstract] Objective Toinvestigatethemethodofisolationandpurificationofepithelialcellsof humaneccrinesweatglandinvitro．Methods Throughdigestinghumanskinwithcollagenasetype Ⅱ，cells ofhumaneccrinesweatglandwereisolated．Highlypurifiedglandcellswereobtainedthroughtransferring into theconditioned medium with amicropipetteforatleastthreetimesunderan inverted microscope． Primary culturewasstarted immediately afterpurification．Cellscould befurtherpurified by enzyme— digestion toeradicatethefibroblasts．Results Collagenasetype Ⅱcoulddigestdermalcollagenwith little damagetoglandcells．Isolatedcellsfrom humansweatglandswereadherenttothewal1ofcultureflask，and theygrew wel1incultures．Theproblem ofcontaminationbytissuedebrisandothercellssuchasfibroblast couldbeovercome．Conclusion Isolationandpuiificationofhumansweatglandcellsinvitroarestil1facing toughproblems．Glandcellsaresuccessfu1toisolateandcultivatewithoutcontamination． [Keywords] sweatgland； cellculture； collagenase； primaryculture； cellularpurification 汗腺在体温调节、体液平衡和物质代谢等方面 (rh—EGF)、胰酶、胰岛素一转铁蛋白一亚硒酸钠、特 有重要作用，大面积烧伤患者皮肤修复过程中常因 级胎牛血清、胶原酶 Ⅱ型(美国Gibco)，三碘 甲状腺 汗腺分泌功能下