Angipoietin1对糖尿病小鼠心肌缺血损伤的保护作用及机制研究.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 摘要Ang 摘要 Ang i opo i et i n-1对糖尿病小鼠心肌缺血损伤的保护作用 及机制研究 摘要 【高血糖对小鼠心肌组织Ang／T i e-2系统的影ninon对心肌缺血损伤 的作用】 糖尿病患者的心血管病死亡率明显高于非糖尿病患者。心肌缺 血诱导的新生血管形成功能在糖尿病患者身上明显下降，是导致糖 尿病患者心血管疾病猝死的一个重要原因。文献报道 Angiopoietin(Ang)／Tie-2系统与糖尿病性肾病或糖尿病性视网膜病 的新生血管形成都密切相关，并且Ang．2／Ang．1比值上调程度与冠 心病的严重程度还呈正相关，但关于这一系统与糖尿病患者的心血 管疾病的关系研究很少。 我们在STZ诱导的糖尿病小鼠模型上观察心肌缺血对Ang ／Tie．2系统的影响。首先结扎小鼠心肌冠状动脉左前降支，造成急 性心肌缺血模型，Western—Blot的结果显示：与正常小鼠相比，STZ 诱导的糖尿病小鼠心肌Ang一2蛋白明显增加，Tie一2表达下降，Ang一1 蛋白没有变化；STZ小鼠心肌Ang．2／Ang一1的比率明显上调；缺血 诱导Tie·2表达上调现象在STZ小鼠组被削弱，并且Ang一1／Tie一2 信号通路的下游底物AKT，可以被缺血诱导活化的现象也在STZ 小鼠心肌消失。然后，我们用TTC染色法观察缺血心肌梗死面积， 摘要用 摘要 用Tunel法和ca蛐趟3fr兔癌组纯泣检测缺血心肌凋亡，发现：STZ 小鼠左室梗死面积是正常锨啦粕鼠韵二l殛，倍，缺血区心肌细胞凋亡 率也显著超过正常小鼠缺血区域。0魍些充分说明糖尿病引起Ang ／Tie．2系统炎平衡”心肌缺血损伤也加重。 Ang是一个与血管新生密切相关的家族。Ang．2和Ang一1都是 Tie．2的天然配体，Ang．1能增进血管内皮细胞Tie．2的磷酸化，进 而促进血管成熟和稳定。Ang．2可以竞争性结合Tie．2阻止Ang．1 的活化功能。我们为了观察Ang／Tie一2系统改变引进的血管形成变 化，运用免疫荧光染色检测持续缺血2周后各组心肌毛细血管和微 动脉的数目。我们的结果显示STZ小鼠心肌缺血后毛细血管密度以 及微动脉数目与糖尿病假手术组没有什么差异，而正常小鼠心肌缺 血2周后，毛细血管和微动脉数目都升高近1．5倍。同时，与新生 血管形成相伴随的代偿性心肌肥厚现象在正常缺血小鼠组表现明 显，STZ小鼠组虽然也出现心肌肥厚，但明显要弱于正常小鼠组。 提示糖尿病可能通过引起Ang／Tie一2系统失平衡，而抑制缺血诱导 的新生血管形成。 [Ang-1保护高糖环境下的心肌缺血损伤】 为了下调Ang．2／Ang一1的比值，纠正Ang／Tie．2系统的失平衡 现象，我们给糖尿病小鼠尾静脉注射Ang一1腺病毒，以腺病毒空载 体注射的糖尿病小鼠组为平行对照，2天后做心肌缺血手术，急性 缺血24小时后观察Ang．1对心肌保护因子AKT、心肌梗死面积、 心肌细胞凋亡的影响。结果显示Ang-1可以促进糖尿病小鼠心肌 Ⅱ 摘要AKT 摘要 AKT活化，缩小心肌梗死面积a还拮撼削拙纽胞凋曲I同时，我们 还给正常野生型小鼠注射Ang；2慵病毒载体矗观：察到·,kings2．：可以进 一步扩大心肌缺血梗死面积：≯切步证实‘Ah酚卫t通：过纠：正糖尿病小鼠 Ang．2／Ang．1的不平衡，拮抗‘灿每一2f的作用而保护糖尿病小鼠心肌 缺血。 我们还观察了缺血2周后Ang-1对心肌新生血管形成和心肌肥 厚的影响，发现Ang一1可以增加糖尿病小鼠心肌微动脉和毛细血管 数目，促进血管形成和冠脉侧支循环发展，利于心肌缺血的恢复， 同时，糖尿病小鼠代偿性心肌肥厚增加。综上所述，进一步证实 Ang一1可以保护高糖环境下的心肌缺血损伤。 [Ang-I拮抗高糖环境下微血管内皮细胞凋亡而保护缺血心肌】 微血管内皮功能紊乱在心脏缺血损伤中扮演一个关键的角色， 而高血糖是引起微血管内皮功能紊乱的确切因子。流行病学资料显 示糖尿病患80％死于心脏微血管并发症。故保护微血管内皮细胞对 维护心脏功能具有重要意义。 我们用高糖培养基孵育微血管内皮细胞3天后，与正常糖培养 基中细胞比较，观察到高糖环境下，微血管内皮细胞Ang．2表达增 加，Ang-1／Tie一2／AKT／eNOS信号通路下调，并对无血清培养基诱 导的凋亡敏感；Ang一1的介入可以拮抗Ang．2而竞争性地结合并激 活Tie．2，启动下游信号分子AKT，甚至于eNOS。由于Ang．1／Tie一2 信号通路激活，高糖内皮细胞对无血清培养基的耐受能力也增加。 我们用MTT法检测细胞活性、Tunel法观察凋亡核形态、酶联免疫 111 摘要 摘要 试验和West-efii锄矾j法姗褫趱或存活蛋白的活性，发现