常用分子生物学技术理及应用.ppt

1、印迹技术的分类 PCR概述 概念：PCR是体外模拟天然DNA复制过程的核酸扩增技术。 PCR类似于DNA在细胞内的复制过程，可以将微量目的基因扩增一百万倍以上。 本节要点 1、PCR技术的基本原理 教学目的 掌握：PCR技术的原理与应用 熟悉：分子杂交与印迹技术 了解：核酸序列分析、基因文库、疾病相 关基因的克隆与坚定、遗传修饰动 物模型的建立及应用、生物芯片技 术、蛋白质相互作用研究技术 思考题 1、简述PCR反应的基本步骤 2、试述Southern印迹杂交的基本步骤 选择题 1、一般影响核酸变性的温度可选在： A．50－60℃ B．60－70℃ C．70－80℃ D．80－90℃ E．90－100℃ 2、鉴别DNA靶分子的杂交称 A．Southern印迹杂交 B． Northern印迹杂交 C． 原位杂交 D．斑点印迹 E．免疫印迹 3、有关PCR的描述，哪个不对 A.是一种酶促反应 B.引物决定扩增的特异性 C.扩增的对象是DNA序列 D.扩增的对象是氨基酸序列 E.PCR技术是1985年由美国 科学家Kary B Mullis建立的 多选题 4、PCR反应体系含有 A. 耐热的TaqDNA聚合酶 B．化学合成的寡核苷酸引物 C. 4种dNTP D．合适的缓冲液体系 E．模板DNA 基因诊断和基因治疗 第九节 Gene Diagnosis and Gene Therapy 定义 直接检测基因结构及其表达水平是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。 一、基因诊断(Gene Diagnosis) 特点 ①以基因作为检查材料和探察目标，属于“病因诊断”。 ②针对特定基因，特异性强。 ③所用技术具有放大效应，故诊断灵敏度高。 ④适用性强，诊断范围广。 DNA序列分析 用于基因突变类型已经明确的遗传病的诊断及产前诊断 。 PCR技术 快速检出样品中的痕量病原微生物。 微量DNA 样品中的基因及基因变异分析。 用于个体识别、亲缘关系鉴定、器官移植术前组织配型、基因连锁分析等等。 样品中痕量病原微生物的迅速检出、分类及分型。 同时分析样品中可能存在的多种不同基因变异方式。 分析样品中耐药菌株的存在和个体对药物或毒物的敏感性。 分析个体的疾病易感状态，如肿瘤、自身免疫病发生的预警。 基因芯片(gene chip) 将某种遗传物质转移到患者细胞内，使其在体内发挥作用,以治疗疾病的方法，称为基因治疗。 二、基因治疗(Gene Therapy) 定义 （一）基因治疗的基本策略 缺陷基因精确的原位修复基因增补 基因失活 基因疫苗 基因矫正 基因置换 （二）基因治疗的基本程序 治疗性基因的选择 基因载体的选择 靶细胞的选择 基因转移 病毒载体 非病毒载体 体细胞 生殖细胞 间接体内疗法 直接体内疗法 基因组DNA文库 (genomic DNA library) cDNA文库 (cDNA library) 基因文库 (gene library) 是指一个包含了某一生物体全部DNA序列的克隆群体。 基因组DNA文库 第一轮筛选 第二轮筛选 第三轮筛选 基因组文库筛选结果举例 cDNA文库是包含某一组织细胞在一定条件下所表达的全部mRNA经逆转录而合成的cDNA序列的克隆群体，它以cDNA片段的形式贮存着该组织细胞的基因表达信息。 二、cDNA文库 第五节???????? 生物芯片技术 Biological Chip Technology 是指将许多特定的DNA片段或cDNA片段作为探针，有规律地紧密排列固定于单位面积的支持物上 ，然后与待测的荧光标记样品进行杂交，杂交后用激光共聚焦荧光检测系统等对芯片进行扫描，通过计算机系统对每一探针位点的荧光信号做出检测、比较和分析，从而迅速得出定性和定量的结果。 一、基因芯片(gene chip) 目 录 基因芯片技术原理 是将高度密集排列的蛋白分子作为探针点阵固定在固相支持物上，当与待测蛋白样品反应时，可捕获样品中的靶蛋白，再经检测系统对靶蛋白进行定性和定量分析的一种技术。 二、蛋白质芯片 第六节 生物大分子相互作用研究技术 The