《物质发光分析》-课件设计（公开).pptVIP

六．化学发光的特点： 1. 灵敏度极高 例：荧光素酶和磷酸三腺甙(ATP)的化学发光分析，可测定2?10-17 mol/L的ATP，即可检测出一个细菌中的ATP含量; 2. 仪器设备简单 不需要光源、单色器和背景校正； 3. 发射光强度测量无干扰 无背景光、散射光等干扰； 4. 线性范围宽 5. 分析速度快 缺点：可供发光用的试剂少；发光反应效率低（大大低于生物体中的发光）；机理研究少。 * 取代基的影响 1)给电子取代基使荧光加强???? 属于这类基团的有－NH2，－NHR，－NR2，－OH，－OR，－CN等。由于这些基团上的n电子云几乎与芳环上的π电子轨道平行，因而实际上它们共享了共轭π电子，形成了p～π共轭，扩大共轭体系。因此，这类化合物的荧光强度增大 2)吸电子基团使荧光减弱而磷光增强 如-COOH、-C=O、 -NO2、-NO、-X等.这类基团都会发生n—?* 跃迁，属于禁阻跃迁，所以摩尔吸光系数小，荧光发射也弱，而 S1-T1 的系间跨跃较为强烈，同样使荧光减弱，相应磷光增强。 * 4) 重原子效应 荧光体取代上重原子后，荧光减弱，而磷光往往相应增强。所谓重原子取代，一般指的是卤素(Cl、Br和I)原子取代，芳烃取代上卤素原子这后，其荧光强度随卤素原子量增加而减弱，而磷光通常相应地增强，这种效应称为“重原子效应”。这种效应被解释为，由于重原子中，能级之间的交叉现象比较严重，使得荧光体中的电子自旋一轨道偶合作用加强，系间跨跃显著增加，结果导致荧强度减弱，磷光强度增强。 3)取代基位置的影响 取代基位置对芳烃荧光的影响通常为：邻位、对位取代者增荧光，间位取代者抑制荧光(－CN取代者例外)。 以上为内在因素. * 外在因素: 溶剂效应： ? 溶剂极性可增加或降低荧光强度（改变?—?*及 n—?* 跃迁的能量）； 温度：温度增加，荧光强度下降（因为内、外转换增加、粘度 或“刚性”降低）。因此体系降低温度可增加荧光分析灵敏度。 pH值：具酸或碱性基团的有机物质，在不同pH值时，其结构可能发生变化，因而荧光强度将发生改变；对无机荧光物质，因pH值会影响其稳定性，因而也可使其荧光强度发生改变。 荧光猝灭：?碰撞猝灭；?静态猝灭；?转入三重态的猝灭； ?电子转移猝灭；?自猝灭。 内滤作用和自吸现象：当溶液中存在能吸收荧光物质的激发光或发射光的物质时，也会使体系的荧光减弱，这种现象称为内滤作用。 　　如果荧光物质的荧光发射光谱在该物质的吸收光谱有重叠，当荧光物质浓度较大时，一部分荧光发射可被自身吸收， 从而使荧光强度降低，称为自吸。这种自吸现象也是一种内滤作用。 六．定量分析 （?，荧光量子产率） 这种线性关系只有在极稀的溶液中才成立。对于较浓的溶液，由于猝灭现象和自吸收等原因，使荧光强度与浓度不成线性关系。 荧光强度大小与: （1）荧光体浓度成正比; （2）激发光强度成正比; （3）测量仪器有关. * Absorbance Deviation (%) 0.001 0.1 0.01 1.1 0.05 5.5 0.10 10.6 0.20 19.9 Table. Deviation from linearity in the relation between fluorescence intensity and concentration for various absorbances §２．荧光仪器 第一单色器 或滤光片 记录仪 第二单色器 或滤光片 荧光 光源 激发 样品池 1）光源：氙灯、高压汞灯、激光； 2）样品池：石英（低荧光材料）； 3）两个单色器：选择激发光单色器；分离荧光单色器； 4）检测器：光电倍增管。 特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。 * § 3.荧光分析法的应用 (1)无机化合物的分析 与有机试剂配合物后测量；可测量约60多种元素。 铍、铝、硼、镓、硒、镁、稀土常采用荧光分析法； 氟、硫、铁、银、钴、镍采用荧光熄灭法测定； 铜、铍、铁、钴、锇及过氧化氢采用催化荧光法测定； 铬、铌、铀、碲采用低温荧光法测定； 铈、铕、锑、钒、铀采用固体荧光法测定 (2)生物与有机化合物的分析 见表 * * * 荧光分析的特点： 灵敏度高：视不同物质，检测下限在0.1 - 0.001?g/mL之间。可见比UV-Vis的灵敏度高得多！WHY？ 选择性好：可同时用激发光谱和荧光发射光谱定性。 分析线性范围比吸收光谱法宽许多。 结构信息量多：包括物质激发光谱、发