免疫检测常瘤用方法及运用秦伟.ppt

ELISA—双抗体夹心法 用特异性抗体进行包被和制备酶标抗体，以检测相应的抗原。 乙肝标志物中HBsAg、 HBeAg的检测常采用本法 ELISA—双抗体夹心法 ELISA—双抗体夹心法 ELISA—双抗原夹心法 用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。 抗HBs的检测 抗HCV的检测 抗HIV的检测 ELISA—双抗原夹心法 ELISA—竞争法 标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。如受检标本中无抗体，则酶标抗体能顺利地与固相抗原结合。加入酶标抗原后就显色深。如受检标本中含有抗体，则与酶标抗体以同样的机会与固相抗原结合，竞争性地占去了酶标抗体与固相抗原结合的机会，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。加入酶标抗原后就显色浅或不显色。 ELISA—竞争法 ELISA—竞争法 最常见的应用： 乙肝HBeAb、 HBcAb检测 ELISA—捕获法 （1）将抗人 IgM 抗体（抗人 IgM μ 链抗体）连接在固相载体上，形成固相抗人 IgM。 （2）加入标本， IgM 抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他抗体。 （3）加入特异性抗原试剂，它只与固相上的特异性 IgM 结合，洗涤。 （4）加入针对特异性抗原的酶标抗体，形成固相二抗 —IgM抗体—抗原 —酶标抗体复合物。 （5）加底物显色，如有颜色显示，则表示血清标本中的特异性 IgM 抗体存在，是为阳性反应。 ELISA—捕获法 以优生四项IgM抗体检测为例 ELISA—捕获法 甲肝IgM抗体测定 ELISA总结 酶免疫测定具有高度的敏感性和特异性， 几乎所有的可溶性抗原抗体系统均可用以检测。它的最小可测值达 ng 甚至 pg 水平。酶免疫测定标记试剂比较稳定，且无放射性危害。因此，酶免疫测定的应用日新月异，酶免疫测定的新方法、新技术不断发展。 固相膜免疫测定 利用微孔膜（主要是醋酸纤维素膜）作为固相进行免疫检测的方法 根据标记物的不同分为两类： 酶标固相膜免疫测定： 酶免疫斑点法 酶免疫印迹法 金标法： 胶体金斑点渗滤试验 胶体金免疫层析试验 酶标固相膜免疫测定原理 酶免疫斑点法 常应用于自身抗体的检测 酶免疫印迹法  胶体金斑点渗滤试验 胶体金斑点渗滤试验 胶体金免疫层析试验 金标双抗体夹心法测抗原 将试纸条下端浸入液体标本中，下端吸水材料即吸取液体向上端移动，流经C处时使干片上的免疫金复合物复溶，并带动其向膜条渗移。若标本中有待测特异抗原，其时可与免疫金复合物之抗体结合，此抗原抗体复合物流至测试区即被固相抗体所获，在膜上显出红色反应线条（T）。过剩的免疫金复合物继续前行，至参照区与固相小鼠IgG结合（免疫金复合物中的单克隆抗体为小鼠IgG），而显出红色质控线条（R）。反之，阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。 胶体金免疫层析试验 胶体金免疫层析试验 检测HIV－Ab的双抗原夹心法 金标法的应用 HCG的检测 金标法的应用 HBs-Ag的检测 金标法的应用 大便潜血试验（FOB） 金标法的应用 轮状病毒和腺病毒抗原检测 金标法的应用 幽门螺杆菌（HP）抗原检测 金标法的应用 O1群霍乱弧菌检测 金标法的应用 HCV-Ab检测 金标法的应用 艾滋病抗体金标检测 金标法总结 上述两种试验的共同特点是：简便、快速、单份测定、可立等结果，除试剂外无需任何仪器设备，且试剂稳定。因此特别适用于急诊检验。 但这类试验不能准确定量，所以主要限于检测正常体液中不存在的物质（例如诊断传染病中的抗原或抗体）以及正常含量极低而在特殊情况下异常升高的物质（如 HCG 等）。 虽然检测敏感性和特异性还不如ELISA高，但是检测的项目越来越多和上述的特点使其应用越来越广泛。 免疫检测常用方法及应用 肥城市人民医院检验科 秦 伟 免疫学检测方法是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、抗体、补体、细胞因子等免疫相关物质及微量物质如激素、酶、血浆微量蛋白、血液药物浓度、微量元素、毒品等试验方法。 这些方法所具有的特异性好、敏感性高、简单、快速和稳定的特点为临床上确定诊断、分析病情、调整治疗方案和判断预后等提供有效的实验依据，使它们在临床的应用进一步普及和推广。 凝集反应(agglutination) 颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应的抗体，或可溶性抗原(亦可用抗体)吸附于与免疫无关的载体形成致敏颗粒与相应的抗体(或抗原)，在有适量电解质存在下，形成肉眼可见的凝集小块。 凝集反应的分类 直接凝集反应 间接凝集