erα36在pc12细胞血清营剥夺耐受性中的作用初探.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 辽宁师范大学硕士学位论文 摘 要 研究表明，雌激素参与缺血性脑卒中的神经保护作用。雌激素主要与雌激素受体结 合，通过基因组模式或非基因组模式发挥生物学效应。新近发现的ER—a36是ER一0【一个 亚型，它广泛表达在乳腺、卵巢、肝、骨等细胞和组织中，并可介导膜起始的雌激素信 号通路。本室前期研究发现，ER—a36也广泛表达在脑内多个区域，但作用尚不明确。 本实验利用RNA干扰技术建立的ER—a36基因敲低细胞系，通过免疫细胞化学、免 疫细胞荧光、MTT、Hoechst染色、荧光素酶分析、Western blot等方法，探讨了ER—ct36 在PCI2细胞血清营养剥夺耐受性中的作用，为临床预防和治疗缺血性脑卒中提供实验 依据。 结果： 1．原代培养不同时问的皮层和海马神经元中均有ER—cG6表达，且主要分布在胞浆 和胞膜上，并与Caveolin．1共定位。原代培养的皮层神经元和海马神经元纯度较高，NSE 免疫阳性率均达到97％。 2．PCI2细胞对血清营养剥夺的耐受具：百明显的时间和血清浓度依赖性。细胞在含 2．5％血清的无酚红培养基中生长速度减慢，其存活率与正常培养PCI2细胞相比显著降 低，以此可建立血清营养剥夺细胞模型；此外，细胞在血清剥夺(o．5％血清)2 h时， 不会发生凋亡。 3．敲低ER—ct36，降低了细胞对低浓度E2的敏感性，增强了细胞血清营养剥夺的耐 受性。其中，pM和nM级别的E2对PCI2细胞促增殖作用减弱；PCI2细胞血清营养剥 夺4 h开始凋亡，敲低ER—a36后细胞血清营养剥夺8 h开始凋亡。 4．ER—Cc36介导E2激活的MAPK信号通路影响PCI2细胞的营养剥夺(低血清)耐 受性。在PCI2细胞中转染ER．a36表达质粒后再分别用不同浓度E2处理，与未用E2 处理组相比，低浓度E2增强荧光素酶活性，10 pM最为显著。ER。a36参与血清营养剥 夺的细胞增殖和存活通路，并介导E2激活的MAPK／ERK和P13K／Akt信号通路的交叉 对话，同时介导低浓度E2激活的MAPK信号通路。 结论：敲低ER．a36降低PCI2细胞对低浓度E2的敏感性、增强细胞血清营养剥夺 的耐受性；ER．cc36参与E2激活的增殖信号通路影响PCI2细胞血清营养剥夺(低血清) 耐受性。 关键词：ER—a36；中枢神经系统；雌激素；血清  ER-a36在PCI 2细胞血清营养剥夺耐受性中的作用初探 The primary study on role of ER—a3 6 in serum deprive tolerability of PC 1 2 cells Abst ract Many researches show that estrogen pla5 S the neuroDrotective role in ischemic stroke． Usually，estrogen interacts with estrogen receptor fER)to perform specific functions either through genomic or nongenomic pathways．ER—a36，as a novel variant of ER—a66．is predominantly associated with tile plasma membrane and could transduce both estrogen—and anti。estrogen—dependent activation of MAPK／t,；RK signaling pathway．Recent studies showed that ER—a3 6 expressed in various cells and tiss ues such as mammary gland．ovary．1iver．bone and SO on．Previous work in our lab indicated that ER—c136 was expressed in the different parts of the brain of mice and rats．but itS function involved i11 brain ischemia and neurondegenerative disorder was still unclear． In this study we used RNA interference technique to establish gene knock—down cellline and detect the effect of