GB/T 18643-2002鸡马立克氏病诊断技术.pdf

cB/T 18643-2002 前 言 马立克氏病(Mareksdisease简称MD)是鸡的一种由马立克氏病疙疹病毒(简称MDV)引起的传 染性肿瘤性疾病。其病理组织学特征为外周神经、性腺、虹膜、各种内脏器官、肌肉和皮肤的单个或多个 组织器官发生肿瘤性淋巴细胞浸润。病鸡表现为消瘦、肢体麻痹，并常有急性死亡。MD传染性强，死亡 率高，是鸡的主要传染病之一。 我国70年代末研究和建立了MD琼脂扩散特异性血清学诊断方法，先后研制和改进了用于MD 血清学诊断用的MD皮肤抗原和MDV细胞培养抗原。这两种抗原用于MD的检测与国外同类进口抗 原相比，具有同样的敏感性。 然而由于MD疫苗的使用，仅能预防MD肿瘤的发生，不能阻止环境中MD野外毒株的感染及在 体内的复制;同时MD血清 「型疫苗的应用，也可以刺激机体产生相应的抗体，并可以检测到病毒抗原 的存在。因此，尽管MD琼脂扩散试验具有良好的特异性，MD琼脂扩散试验的检测结果，对于MD的 临床诊断仅具有参考价值。 MDV广泛存在于自然界中。除SPF鸡群外，几乎所有的鸡场都不同程度的存在着MDV野外毒株 的流行。MDV野外毒株致病力强弱存在着差异，因此病鸡临床主要表现为神经型(古典型)和内脏型 (急性型);此外，比较少见的还有皮肤型和眼型，有时可以混合发生。大多数死于MD的鸡剖检时，在各 内脏器官中可以见到单发性或多发性肿瘤，最常见的肿瘤发生部位有肝脏、肾脏、性腺等内脏器官。值得 注意的是，其他一些禽病也可以导致内脏肿瘤的发生，如禽白血病AQ( )和网状内皮增生病(RE)。其肿 瘤的外观形态与MDV引起的肿瘤在临床剖检时无法区别，应通过病理组织学变化进行判定。 另外，MD的临床诊断还可以通过MD特征性的临床症状和病理变化作为诊断依据。如病鸡临床症 状表现为两腿前后伸展，呈“劈叉”姿势;尸体剖检时可见到坐骨神经单侧或双侧肿大、横纹消失、皮肤发 生肿瘤、虹膜褪色和瞳孔不规则。这些变化在其他传染病很难见到，可以作为MD的临床诊断指征。 总之，由于MD发病机理及致病过程比较复杂，其血清学诊断方法应用范围有一定的局限性，对于 临床诊断仅具有参考价值。而MD的特征性的临床症状及剖检病理变化在发病鸡群中并不常见，MD的 临床诊断一般需要病理组织学检查进行确诊。 本标准的附录A、附录B都是标准的附录。 本标准由中华人民共和国农业部提示。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。 本标准主要起草人:赵晓岩、吴东来。 中华 人 民共 和 国 国家标 准 Gs/r 18643-2002 鸡马立克氏病诊断技术 DiagnotictechniquesforMareksdisease 1 范围 本标准规定了鸡马立克氏病(MD)的诊断技术。 木标准适用于MD的流行学病普查、产地和口岸检疫、SPF鸡群的疫病监测 2MD琼脂扩散试验检测技术 鸡马立克氏病琼脂扩散试验既可以用于马立克氏病病毒抗原的检出，也可以用于马立克氏病病毒 抗体的检出 该方法一般在马立克氏病病毒感染14d-24d后检出病毒抗原;抗体的检出一般在病毒 感染3周后 2.1 材料准备 2.1门 抗原和标准阳性血清。 2门.2 溶液配制: a)pH7.40.01mol/-1磷酸盐缓冲液; b)1%硫柳汞溶液; c)生理盐水。 以上各种溶液配制方法见附录A(标准的附录)。 2门3 琼脂板的制备:见附录s(标准的附录)。 2.2 操作方法 2.2.1 马立克氏病病毒抗原检测 2.2.1.1 打孔 2.2门门.1在已制备的琼脂板(见附录s)上，用直径4mm或3mm直径的打孔器按六角形图案打孔， 或用梅花形打孔器打孔。中心孔与外周孔距离为3mm, 2.2.1.1.2 将孔中的琼脂用8号针头斜面向上从右侧边缘插人，轻轻向左侧方向挑出，勿损坏孔的边 缘，避免琼脂层脱离平皿底部。 2.2.1.2 封底 用酒精灯火焰轻烤平皿底部至琼脂轻微溶化为止，封闭孔的底部，以防样品溶液侧漏 2.2门.3 加样 用微量移液器吸取用灭菌生理盐水稀释的标准阳性血清(按产品使用说明书的要求稀释)滴人中