eaal细胞联合全反式维甲酸人肺腺癌细胞株a549体内外作用的研究.docxVIP

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  • 2018-12-22 发布于福建
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eaal细胞联合全反式维甲酸人肺腺癌细胞株a549体内外作用的研究.docx

eaal细胞联合全反式维甲酸人肺腺癌细胞株a549体内外作用的研究

河北医科大学 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获得的研究成果,其知识产权归河北医科大学所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表 与学位论文主要内容相关的论文,第一署名为单位河北医科大学,试 验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。 否则,承担相应法律责任。 研究蝴瑚聊麟军承级 河北医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写, 文责自负。 研究生签名:王兹二e餐 导师擗第醒 们心年≥月纠日 万方数据 目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 一4 英文缩写 ·8 研究论文EAAI,联合全反式维甲酸对人肺腺癌细胞株A549体内外作用 的研究 引言 ·9 第一部分EA AI.细胞联合ATRA对人肺腺癌细胞株A549体外作用研究 前言翮舌 ·1~1‘ 材料与方法 ·12 结果 ·23 附图 28 附表 38 讨论 ·43 刀、结 ·46 参考文献 .46 第二部分E儿也细胞联合ATRA对人肺腺癌细胞裸鼠移植瘤的体内 作用的研究 前言日Ⅱ舌 .48·48 材料与方法 ..49 结果 .53 附图 .56 I;f;}表 .6l 讨论 .63 /J、结 .65 参考文献 65 结论 67 综述过继性细胞免疫治疗在肿瘤治疗中的作用和研究进展 一68 致谢 79 个人简历 80 万方数据 中文摘要EAAk细胞联合全反式维甲酸对人肺腺癌细胞株A549 中文摘要 EAAk细胞联合全反式维甲酸对人肺腺癌细胞株A549 体内外作用的研究 摘 要 目的:观察体外扩增活化的自体淋巴细胞(Expanded Activated Autologouse Lymphocytes,EAAL)与全反式维甲酸(all-tram retinoic acid, An认)联合应用对肺癌细胞株A549及裸鼠肺癌移植瘤的杀伤作用,探 讨两者联合应用的相关机制,为开展有效的肺癌生物治疗提供实验和理论 依据。 方法:1 EAAI,细胞与全反式维甲酸对A549细胞体外作用研究: 实验主要分为4组,依次为Control组,EAAI,组,ATRA组, EAAL+ATRA组。 (1)光学显微镜下观察各组A549细胞形态学的变化。 (2)SRB比色法检测各组A549细胞生长增殖变化。 (3)细胞划痕实验检测各组A549细胞迁移能力。 (4)流式细胞术检测各组A549细胞周期分布情况。 (5)RT-PCR技术检测A549细胞凋亡相关基因Bcl.2、Bax及Survivin mRNA的表达情况。 (6)免疫组化技术及western blot检测凋亡相关蛋白Bcl.2、Bax及 Survivin的表达情况。 2 EAAI,细胞与全反式维甲酸对A549细胞裸鼠皮下移植瘤体内作用 研究 裸鼠成瘤后随机分为6组,依次为:空白对照组(生理盐水组)、阳 性对照组(O.5mg/kg,DDP)、ATRA组(15mg/kg)、E舢地细胞组(1 ×10 7个/次)、EAAI,细胞与ATRA同时联合应用组、EA AI,细胞与ATRA 序贯联合应用组。 (1)处理过程中,隔日测量裸鼠肿瘤体积,建立各组肿瘤生长曲线; 处理结束后,处死全部裸鼠,完整剥除瘤体,测量肿瘤块儿体积,计算肿 瘤抑制率,比较各组对肿瘤生长的影响,HE染色观察肿瘤细胞形态学变 化。 万方数据 中文摘要(2)免疫组化技术检测各组荷瘤小鼠肿瘤组织细胞的凋亡相关蛋白 中文摘要 (2)免疫组化技术检测各组荷瘤小鼠肿瘤组织细胞的凋亡相关蛋白 Bcl.2、Bax及Survivin的表达情况。 结果:l将E丸地细胞和域ATRA作用于A549细胞48h后,随着 ATRA的浓度和E础地细胞效靶比的升高,A549细胞开始出现皱缩、变 圆、脱落、体积变小及数量减少等形态学方面的改变,并且可见凋亡小体。 而对照组A549细胞大小均匀、生长密集。与对照组相比,E础地细胞或 ATRA单独处理组对A549细胞的形态学方面的杀伤效果显著, EAAL+ATRA组对A549细胞形态学杀伤作用较以上各单独处理组均有明 显增强。 2 SRB实验结果显示,ATRA和EAAI,细胞对A549细胞增殖有显著 的抑制作用(脚.05),并且存在浓度(效靶比)和时间依赖性,ATRA的 最适浓度为10巧mol/L,EAAL细胞的最适效靶比为50:1,并且EAAI,联 合ATRA处理对A549细胞杀伤活性与对照组和单独使用ATRA或E础让 细胞相比,其杀伤活性均明显增加(火O.05)。 3经A

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