erα36影响肝癌胞转移及营养剥夺耐受性的初步研究.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 辽宁师范大学硕士学位论文 摘 要 肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)是死亡率很高的恶性肿瘤之一。流行 病学调查发现，男性HCC发病率通常高于女性，即具有显著的性别差异。提示，雌激 素在HCC的发生发展中具有重要作用。雌激素与不同的雌激素受体(Estrogen Receptor， ER)结合可以通过经典的基因组效应，也可以通过快速的非基因组效应参与肝癌的发生 和发展。雌激素受体不同亚型的表达量也可以作为肝癌细胞恶性转移的指示因子。肝癌 患者死亡的主要原因是肝癌细胞的肝内侵袭及转移，最终导致肝脏功能衰竭。然而肝癌 早期大部分癌细胞并无转移能力，只有小部分会发生肝外转移，因此，研究肝癌细胞转 移能力的改变及机制具有重要意义。 ER．a36是2005年发现的一种新型雌激素受体亚型，不仅可以定位在质膜上介导雌 激素的快速调控作用，还可以转位至细胞核中通过招募转录因子调控靶基因转录。实验 室前期研究发现，ER-a36在正常肝细胞及不同类型肝癌细胞中表达量均有差异，然而 其在肝癌发生发展中的作用机制并不十分清楚。 本研究以人类原发性肝癌细胞系SMMC．7721为实验材料，转染ER-a36．shR．NA干 扰质粒，建立ER-a36敲低的细胞模型(7721／Sh36)，采用RT．PCR、Soft agar、Transwell、 增殖曲线实验检测ER-a36无雌激素作用时在人肝癌细胞增殖、粘附、侵袭、转移中的 作用，通过MTT、Western Blot、荧光素酶报告基因实验等方法研究ER．a36在雌激素 作用时的转录活性及其介导激活的信号通路在肝癌细胞中的作用机制，旨在为肝癌临床 研究提供一新的靶标。 结果如下： 1)利用基因干扰技术，建立了ER—a36稳定敲低的人肝癌细胞模型7721／Sh36，观 察了雌激素及营养剥夺对细胞存活率的影响，结果发现，与对照组相比，ER-a36基因 敲低导致细胞营养剥夺耐受性降低，而低浓度血清补充会使细胞存活率升高。 2)ER．a36敲低降低肝癌细胞高浓度雌激素敏感性并介导低浓度雌激素信号通路的 激活。ER-a36介导肝癌细胞膜雌激素信号通路的激活，营养剥夺后肝癌细胞死亡率与 E2浓度呈线性关系，但敲低ER．a36后线性相关性消失，进一步研究发现，E2，E213．BSA 及ER．a36特异性激动剂ICl62均可激活ER．a36，ER-a36可介导1 nM(低浓度)E2激 活MAPK信号通路。 3)ER-a36敲低促进肝癌细胞恶性转移。与对照组相比，ER-a36敲低后细胞间密度 依赖性接触抑制作用解除，平台期停留时间显著延长，克隆形成能力增强，具体机制可  ER吨36影响肝癌细胞转移及营养剥夺耐受性的初步研究 能与增殖相关蛋白PCNA及p-MAPK表达量升高，抗凋亡蛋白p-Pda降低有关；肝癌细 胞转移、侵袭及粘附能力显著提高，其机制与MMP．2表达量升高有关。 结论：在肝癌细胞中，ER．a36既可作为雌激素受体亚型介导调控肝癌细胞雌激素 信号通路，也可作为调控因子影响肝癌细胞恶性程度。 关键词：肝细胞癌；ER-a36；转移；侵袭；雌激素  辽宁师范大学硕士学位论文 Effects of ER-a3 6 on Tolerance to Serum Deprivation and Migration Abilities of Liver Cancer Cells Abstract Hepatocellular carcinoma is one of the most common fatal cancer in men．The incidence of HCC is about 3 to 5 times higher in men than in women．Furthermore，a similar gender disparity is seen in mice model，which indicates that estrogen plays pivotal role in HCC development．Estrogen binds to and activates estrogen receptor(ER)，which mediates genomic and non-genomic effects．The expression of ER-a subtypes was considered to indicate the malignant degree of liver cancer． The 1eading cause of death among HCC patients iS the intrahepatic invasi