色谱柱分类与选择.pptx

色谱石油醚组分色素碳酸钙颗粒1906 年俄国植物学家Tsweet 发现色谱分离现象一、色谱起源高效液相色谱仪的分析原理高效液相色谱仪的结构色谱柱在高效液相色谱仪中的作用和峰形产生原理色谱柱高压泵检测器色谱工作站进样器1 Basic principle of chromatographic separation1.1 色谱分离基本原理Partition coefficient K分配系数硅胶颗粒基质合成步骤：1.合成硅胶基质2.键合配体(键合相)3.端基封尾 end-capped90年代以后方式：organosilica polymer 有机单晶硅聚合的硅胶，即B类硅胶以传统方式制造硅胶色谱填料的过程: 起始原料为矿物硅酸盐（如泡花碱），即A类硅胶C18键合并端基封尾后还能看见什么？硅羟基!—即使进行高密度键合，硅胶表面仍将残留约50%硅羟基(SiOH)!填料的端基封尾–封口残余硅羟基–减少不可逆吸附或拖尾–增加碳含量（0.1% -1%）单、双、三官能团键合三官能团键合二官能团键合单官能团键合键合封尾常用封尾end-capped ：三甲基硅氧烷由于空间位阻的存在，键合反应最多只能覆盖50%的硅羟基，超过一半硅羟基是活性硅羟基，与碱性基团会发生离子交换作用，增加了保留，导致峰形拖尾，用短链氯硅烷（如三甲基氯硅烷）键合活性的硅羟基，可以减小这种影响，这种操作被称为封尾，封端，封口。极性封尾，增加极性保留Hypersil ODS即没有封尾Hypersil ODS-2有封尾封尾空间位阻：异丙基硅氧烷，异丁基硅氧烷空间位阻极性嵌入 polar embedded 问题：下列色谱柱如何选择？（答案见备注信息）amidohexadecylsilyl silica gelColumn: — size : l = 0.25 m, ? = 4.6 mm; — stationary phase: diisopropylcyanopropylsilyl silica gel for chromatography R (5 μm) with a specific surface area of 180 m2/g and a pore size of 8 nm;— stationary phase: spherical octadecylsilyl silica gel for chromatography R (5 μm) with a specific surface area of 170 m2/g and a pore size of 12 nm.— stationary phase: aminopropylsilyl silica gel for chromatography R (5 μm),— stationary phase: end-capped octadecylsilyl silica gel for chromatography R (5 μm),— stationary phase: base-deactivated octadecylsilyl silica gel for chromatography R (3 μm).— stationary phase: o ctylsilyl base-deactivated silica gel for chromatography R (4 μm) with a pore size of 6 nm,— stationary phase: end-capped polar-embedded octadecylsilyl amorphous organosilica polymer R (5 μm); Mobile phaseMix 35 volumes of acetonitrile R and 65 volumes of a 5.23 g/l solution of dipotassium hydrogen phosphate R previously adjusted to pH 7.0 with phosphoric acid R.以传统方式制造硅胶（A类硅胶）色谱填料的过程: 起始原料为矿物硅酸盐（如泡花碱）Na2SiO3 (矿物) + 2H+Si(OH)4 (silicic acid)+ 2Na+硅胶颗粒(含金属杂质!)C18/C8 bonding + endcappingC18/C8 Reversed Phases(最终仍带金属杂质!)+)(CHHN32+(CH)HN32碱性分析物在硅胶柱上的拖尾机理 双重保留机理:1). 与键合相的的疏水性作用; 2). 与残余硅醇基间的离子交换作用与键合相的疏水性作用SiO-O-SiSiO-O-Si离子交换作用OHO- SiO-O-SiS