第章蛋白四质的结构与功能ppt课件.ppt

（一）透析及超滤法 1. 透析(dialysis) 利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。 透析液 浓缩的蛋白混合样品 透析袋 临床应用： 血液透析 血液和透析液在透析器内借半透膜接触和浓度梯度进行物质交换，血液中的代谢废物和过多的电解质向透析液移动，透析液中的钙离子、碱基等向血液中移动。 2. 超滤法 应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的。 （二）丙酮沉淀、盐析、免疫沉淀 盐析——盐能破坏其水化膜，中和其所带电荷，而 且不会导致蛋白质变性 有机溶剂（乙醇、丙酮等）沉淀——破坏其水化膜 生物碱试剂沉淀——中和其正电荷 重金属盐沉淀——中和其负电荷 利用特异抗体识别相应的抗原蛋白，并形成抗原抗体复合物的性质，可从蛋白质混合溶液中分离获得抗原蛋白。 免疫沉淀法： （三）电泳 指带电粒子在电场中向电性相反的电极泳动的现象。 电泳(elctrophoresis): 影响电泳的因素： 所带电荷的性质、数量、分子大小、形状 1、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳： 常用于蛋白质分子量的测定。 蛋白质的分离与纯化 根据支撑物的不同，可分为薄膜电泳、凝胶电泳等。 几种重要的蛋白质电泳： 2、等电聚焦电泳： 通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质。 3、双向凝胶电泳： 蛋白质组学研究的重要技术。 蛋白质的分离与纯化 （四）层析(chromatography) 原理: 待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据待分离的Pr颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使Pr组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相达到分离蛋白质的目的 。 离子交换层析： 利用各蛋白质的电荷量及性质不同进行分离。 常用的层析方法： 2.凝胶过滤 (gel filtration)： 又称分子筛层析，利用各蛋白质分子大小不同分离。 （五）超速离心(ultracentrifugation) 超速离心法既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。 蛋白质在离心场中的行为用沉降系数(sedimentation coefficient, S)表示，沉降系数与蛋白质的密度和形状相关 。 六、多肽链中氨基酸序列分析 分析蛋白质中氨基酸残基组成 多肽链的氨基末端与羧基末端的测定 两种以上方法水解肽链，得到一系列大小不同的肽段 测定各肽段的氨基酸排列顺序 分析有重叠结构的各个肽段序列，推导出完整肽链中氨基酸顺序 （1）N端测定： 二硝基氟苯法 (FDNB法)、丹磺酰氯法 (DNS法) （2）C端测定： 羧肽酶A：水解除Arg、Lys、Pro外的氨基酸残基 羧肽酶B：只水解Arg、Lys 羧肽酶C：所有的氨基酸残基 （3）常用水解肽链的酶： 胰蛋白酶：水解Arg、Lys羧基侧的肽键 糜蛋白酶：水解芳香族氨基酸羧基侧的肽键 溴化氰（CNBr）：水解Met羧基侧的肽键 例．根据下列资料推出某肽的氨基酸排列顺序。 1）完全酸水解得到Phe、Pro、Glu、Lys、Met和NH3： 2）用FDNB试剂处理得到DNP－Phe 3）用溴化腈水解此肽得到一个以高丝氨酸内酯结尾的二肽和一个三肽4）用胰蛋白酶水解产生一个三肽5）用羧肽酶A或羧肽酶B处理都不能得到阳性结果 Phe-Met-Lys-Glu-Pro 课后思考题 1．名词解释：亚基、蛋白质的等电点、蛋白质的变性 2．何谓蛋白质一、二、三、四级结构，维持蛋白质各级结构的化学鍵是什么？ 3. 简述谷胱甘肽的结构特点及生理功能;（2005年南方医科大学生物化学试题） 4. α-螺旋结构特点； 5. 请举例说明蛋白质一级结构与功能的关系(北京大学医学部2002年生物化学试题)； 6. 什么是蛋白质的变性？变性的机制是什么？举例说明蛋白质变性在临床上的应用。 * * 六、蛋白质组学 蛋白质组是指一种细胞或一种生物所表达的全部蛋白质，即“一种基因组所表达的全套蛋白质”。 第三节 蛋白质结构与功能的关系 （一）一级结构是空间构象的基础 一、蛋白质一级结构与功能的关系 牛核糖核酸酶的一级结构 二硫键 天然状态，有催化活性 尿素、 β-巯基乙醇 去除尿素、 β-巯基乙醇 非折叠状态，无活性 （二）一级结构相似的蛋白质具有相似的高级 结构与功能