自由基损伤学说及可抗氧化剂.ppt

* * * * * ?MAPK信号级联反应 Stimulus Growth factors, Mitogen, GPCR p38 MAPK Stress, GPCR, Inflammatory cytokines, Growth factors Stress, Growth factors, Mitogen, GPCR MEKK1, 4, MLK3, ASK1 MEKK2, 3, Tpl2 MLK3, TAK, DLK Raf, Mos, Tpl2 MKK3/6 MEK1/2 MKK4/7 MEK5 ERK1/2 MAPKKK Growth, Differentiation, Development Inflammation, Apoptosis, Growth, Differentiation Growth, Differentiation, Development ERK5/BMK1 JNK1,2,3 MAPKK MAPK Biological responses 自由基的检测 * 化学发光法 检测原理：活性氧、氧自由基与发光增效剂反应，释放能量，产生化学发光。 检测对象：超氧阴离子、羟自由基、H2O2 和脂质过氧化产生的自由基都可以产生化学发光。 优点：灵敏、快速、操作简单、价格低廉。 缺点：非特异性。另外，几乎所有的氧化剂，如次氯酸、高锰酸钾等都可以与发光增效剂反应，产生化学发光，严重干扰活性氧的检测。Fe2+也可以产生非常强的化学发光。 * 二氢乙啶(Dihydroethidium, DHE) 检测原理：可自由透过活细胞膜进入细胞内，并被细胞内的超氧阴离子氧化，形成氧化乙啶；氧化乙啶可掺入染色体DNA中，产生红色荧光。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种快速简便的组织或培养活细胞中ROS经典检测方法。 * Circulation. 2008;117:1045-1054. Determination of ROS by DHE Staining * 检测原理：在碱性条件下，光泽精与超氧阴离子等过氧化物作用形成激发态N2甲基吖啶(N2methylacridan) 。并发出450nm的激发光，测量此激发光的强度即可定量产生的超氧阴离子的浓度。可以定量，但检测时间长，并需要新鲜组织样本。 Lucigenin (光泽精)-Enhanced Chemiluminescence * Determination of ROS by Lucigenin-Enhanced Chemiluminescence * 检测原理：DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF，检测DCF的荧光就可以得到细胞内活性氧的水平。 2’, 7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH-DA) * Br J Pharmacol. 2008;154(1):105-13. Determination of ROS by DCFH-DA Staining * * * * 影响自由基的药物 * 影响自由基的药物 抗氧化药物 促氧化药物“以毒攻毒” * 抗氧化药物 ① 维生素类及内源性物质，如维生素E、维生素C、维生素A、GSH等； ② 活性氧防御酶类，如SOD、过氧化氢酶、过氧化物酶、Co-Q类等； ③ 化合物，如SOD模拟化合物、普罗布考以及一些传统药物如硫酸锌、甘露醇、钙拮抗药、血管紧张素转化酶抑制药、肼肽嗪、乙酰半胱氨酸、β2受体激动药及阻断药等； ④ 中药及其有效成分，如银杏、丹参、云芝及其所含的黄酮类、酚类、多糖类等. * * ① 化学性直接产生自由基及活性氧； ② 通过作用于机体防御机制，促进机体内自由基、活性氧产生。巨噬细胞、中性粒细胞在对侵入机体的抗原通过吞噬作用而进行消化分解的同时，产生超氧化物、过氧化物以破坏抗原。 促氧化药物 * 莫特沙芬进入机体后可选择性定位并在癌细胞中蓄积，破坏细胞代谢，产生ROS并促使细胞凋亡。临床前研究显示莫特沙芬可加强放疗及几种常用化疗药的疗效。 促氧化药物 * * * * * * * * * * * * * * * 广东药学院药理系 自由基损伤学说及抗氧化剂 周四桂 * 铁器在空气中暴露日久会生锈，洁白的银器也会由于氧化变黑。人的机体与金属一样也会受到氧化而导致“生锈”，罪魁就是自由基。 * 1956 年英国分子生物学家Harman 首次提出： “氧化应激决定寿命”，即自由基衰老学说， 认为衰老是自由基引起的组织随机毒害的结果。 Harman, D. J. Gerontol. 1956; 11: 298