TransEasy电转试剂盒说明书.PDFVIP

Trans Easy 电转试剂盒说明书 V1.1版本，更新日期：2018年5月7日 货号：CA3012040 规格：4 mL 储存条件： 基础液-20℃，添加剂-80 ~ -20℃，接种液-20℃；混匀后 2~8℃，1 个月内使用完毕。 产品简介： 质粒电转是利用瞬间高压造成细胞膜的不稳定，形成电穿孔，将核苷酸、DNA 与 RNA、蛋 白、糖类、染料及病毒颗粒等导入原核和真核细胞内的实验技术，可以应用到转染、转化、 电融合与插入等。 赛贝生物（Cellapy）通过实验探索，对比各种不同条件后开发并推出了一种稳定、高效 的电转试剂：Trans Easy。该电转试剂可大幅提高电转效率和电转后细胞的存活率，是一种 安全、快速、经济的选择。 本说明书将以体细胞质粒电转重编程为诱导多能干细胞实验和特定基因敲除细胞系构建 实验为例介绍该产品的用法。 产品内容： 组份代码 名称 规格 数量 CA3012040-1 Trans Easy 电转试剂基础液 4 mL 1 瓶 CA3012040-2 Trans Easy 电转试剂添加剂 80 μL 1 支 CA3012040-3 Trans Easy 电转试剂细胞接种液 200 μL 1 支 试剂准备： 第 1 页 北京赛贝生物技术有限公司 地址：北京市昌平区生命科学园创新大厦 D 座 202 室 电话：010邮箱 ：support@ 将基础液与添加剂在（2~8）℃完全溶解，把添加剂加入基础液中，并颠倒混匀，组成电 转工作液。若短期内使用次数较少，可根据使用量将基础液与添加剂按50：1的比例混匀，剩 余量分装后置于-80 ~ -20℃保存。电转试剂细胞接种液在电转后使用，推荐用量为1：2000， 所有试剂避免反复冻融。 所需材料： Trans Easy 电转试剂盒 （Cellapy:Cat.CA3012040） 电转仪（Lonza, 4D-Nucleofector，Amaxa， Nucleofector） 电转所需质粒 用于电转的细胞 其他常规培养液、培养板等 使用方式： （一）人多能干细胞特定基因敲除细胞系的构建： 1. 提前一天使用适量基质胶包被六孔板，37℃恒温二氧化碳细胞培养箱过夜备用； 2. 实验前吸弃基质胶，加入2 mL多能干细胞培养基（可用赛贝公司PSCeasy: Cat.CA1001500 或PGM1:Cat.CA1007500）到六孔板中，按1:2000加入Trans Easy 电转试剂细胞接种液1 μL，再放入37℃培养箱预平衡10 min； 3. 取100 μL电转工作液加入到无菌EP管，再加入电转所需质粒的量 （推荐量为5 μg）， 质粒体积不超过10 μL，混匀后待用； 4. 培养人胚胎干细胞或人诱导多能干细胞至汇合度达到90%，消化传代并计数，一次电转所 5 需细胞数为8 × 10 ； 5. 取足够电转的细胞悬液到15 mL离心管，800 rpm 离心3 min； 第 2 页 北京赛贝生物技术有限公司 地址：北京市昌平区生命科学园创新大厦 D 座 202 室 电话：010邮箱 ：support@ 6. 以Lonza 4D-Nucleofector为例，打开仪器并设置适当程序待用； 7. 尽可能多地吸弃上清，用（3）中混匀的电转液100 μL 重悬细胞沉淀，动作迅速且尽可 能不