GLP2对小肠淤血再灌注损伤作用的初研究.docxVIP

目录摘要 目录 摘要 1 Abstract ．．4 前言翮『雷 ．8苓 材料与方法 10 1．实验材料 1 O 1．1实验动物 10 2。1主要仪器和设备 10 1．3主要试剂和药品 ．1 1 2．实验方法 12 2．1主要溶液配制 ．1 2 2．2实验动物分组 ．1 3 2．3动物给药方式及模型的建立 ．．13 2．4术前准备 ，1 5 2．5样本收集 一1 5 2．6小肠组织石蜡包埋 ．1 6 2．7小肠组织石蜡切片 ．1 6 2．8小肠组织HE染色 ．．1 6 2．9小肠组织超微结构观察 ．1 7 2．10小肠增殖指标Ki67蛋白表达检测 ．17 2．1 1 TUNEL细胞凋亡原位检测 。1 8 2．12小肠组织总蛋白提取 20 2．13 BCA法蛋白浓度测定 20 万方数据 2．14 2．14 Western blotting实验 20 2．15统计学处理 22 结果 ．22 1． 小鼠小肠淤血再灌注模型中小肠的病理学改变 ．．22 2． 小鼠小肠在小肠淤血再灌注模型中超微结构的变化 ．．24 3． 小肠淤血再灌注模型中小鼠小肠组织增殖指标Ki67蛋白表达 检测 27 4． 小鼠小肠组织在小肠淤血再灌注模型中细胞凋亡原位检测 (TUNEL)．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28 5． 小肠淤血再灌注模型中各组小鼠小肠组织cleaved caspase．3的 表达变化 ．．．29 讨论 30 结论 34 参考文献 ． 34 综述 ． 37 致谢 ． 50 万方数据 大连医科大学硕士学位论文GLP．2对小肠淤血再灌注损伤作用的初步研究 大连医科大学硕士学位论文 GLP．2对小肠淤血再灌注损伤作用的初步研究 硕士研究生：刘素平 指导教师：朱亮 专业名称：生理学 摘要 研究背景和目的 原位肝移植术(Orthotopic Liver Transplantation，OLT)是治疗急、慢性重型肝炎， 肝硬化肝功能失代偿等终末期肝病的最有效治疗手段。肝移植后，新型免疫抑制 剂的使用减少了移植后排斥反应的发生率，却增加了病人发生感染和癌症的可能。 同时，肝移植手术无肝期阻断了门静脉，肠系膜上静脉回流受阻，造成小肠粘膜 淤血，开放血流后，淤血小肠血流恢复正常，小肠经历再灌注，上述肝移植过程 中不可避免出现的小肠淤血再灌注损伤的病理生理学过程，可导致肠粘膜细胞的 凋亡，屏障功能受损，进而导致细菌移位。肝移植术后的肠源性感染易引发全身 炎症反应综合症(systemic inflammatory response syndrome，SIRS)甚至原发性移植肝 无功能(primary non．function，PNF)及多器官功能障碍综合症(multiple organ dysfunction syndyrome，MODS)，是阻碍受体及移植肝存活率提高的重要因素。 胰高血糖素样肽．2(glucagon．1ike peptide 2，GLP-2)是具有肠道特异性作用 的肠上皮生长因子。研究认为，GLP．2能增强肠道屏障功能，促进正常小肠黏膜 生长，促进肠道炎症引起的肠黏膜损伤的修复和愈合， 通过抑制细胞凋亡并促进 肠上皮细胞增殖减轻小肠缺血／再灌注损伤，促进移植小肠结构和吸收功能的恢复。 有关GLP．2对肝移植过程中小肠淤血再灌注损伤作用的相关文章尚未见报道。 本实验的目的是通过探讨GLP．2处理的小肠淤血再灌注模型中小肠粘膜及其 线粒体的变化，说明GLP一2在减少小肠淤血再灌注损伤中的作用以及线粒体在该 模型中小肠损伤、凋亡过程中的作用。为肝移植过程中小肠相关保护措施的实施 提供新的可行的方法和理论支持。 万方数据 大连医科大学硕士学位论文方法 大连医科大学硕士学位论文 方法 选择40只健康雄性C57BL／6小鼠，随机分为8组：①正常对照组(A)；预处 理组，包含：@GLP．2预处理组(B1)，⑧：GLP．2预处理+淤血再灌注组(B2)，④： PBS预处理+淤血再灌注组(B3)；⑤：GLP．2预处理+淤血再灌注+GLP．2治疗组(C)； 治疗组，包含⑥：淤血再灌注+GLP．2治疗组(D1)，⑦：淤血再灌注+PBS治疗组(D2)； ⑧淤血再灌注组(E)。采用夹闭．开放肠系膜上静脉的方式(即淤血再灌注)模 拟肝移植手术过程中无肝期的小肠淤血再灌注动物模型，留取小肠组织进行检测。 检测指标：HE染色和透射电镜观察小肠形态学和超微结构的变化；免疫组织化学 染色检N4,肠增殖指标Ki67蛋白的表达，TUNEL染色检测小肠的凋亡情况； western blot检测小肠组织中cleaved caspase．