实训三 细菌上染色法.pptVIP

2001-2 常用染料 碱性染料：带正电荷，如美蓝、结 晶紫、碱性复红等 酸性染料：带负电荷，如伊红、酸 性复红或刚果红等酸性染料染色 中性染料：又称复合染料，如伊红 美兰、伊红天青等 革兰染色影响因素： * * 中药和生物系 实训三细菌染色法 1.细菌染色法 革兰染色法 复染色法 单染色法 负染色： 正染色 死菌 活菌： 抗酸染色法 芽孢染色法 姬姆萨染色法 荚膜染色法 用美蓝或TTC等作活菌染色 2.染色原理：小、色差 染色法：简单、革兰染色 3.染色方法 （1）单染色法： 菌种－－枯草芽孢杆菌（观察芽孢） （2）革兰染色法： 菌种－－金黄色葡萄球菌或大肠埃希菌（观察革兰染色性） 涂片 干燥 固定 结晶紫 1min （1）单染色步骤：枯草芽孢杆菌 镜检 水洗 干燥 记录结果 教师评分 无菌操作 两环菌液 直径约1cm 晾干 烘干 等全干 过外焰3次 目的 不烫 染液不干 全干再看 用油镜 （2）经典染色法 －－革兰染色法 革兰阳性菌 G+（紫色） 革兰阴性菌 G-（红色） 革兰染色法 由丹麦医生革兰于 1884年创立。 涂片 干燥 固定 结晶紫 1min 碘液 1min 水洗 95％乙醇 30s 水洗 蕃红 2-3min 水洗 镜检 水洗 干燥 革兰染色步骤:金黄色葡萄球菌或大肠埃希菌 革兰染色原理： ①壁结构、成分差异。（主） G＋菌壁厚、密,脂类少,乙醇不易渗入脱色 G－菌壁薄、疏,脂类多,乙醇易渗入脱色 ②等电点不同。 G＋菌的低，结合阳性染料多 G－菌的高，结合阳性染料少 ③细胞内核糖核酸镁盐含量不同。 G＋菌的多，染料结合牢固，难脱色 G－菌的少，易脱色 G+（紫）×1000 G— （红）×1000 革兰染色意义:鉴别；致病性；药物选择 菌 龄—培养18-24小时的幼龄菌 涂片厚度—宜薄不宜厚 各试剂作用时间 脱色时间—关键步骤，一般30秒 过长— 假阴性 过短— 假阳性 4.实训结果:2片/人,单染色30分;革兰染色50分 评分标准： ①染色结果是否正确 ②找到目标 ③是否最佳目标 ④目标是否清晰 ⑤光线是否适宜 × 单染:枯草芽孢杆菌 教师 评分 放大 倍数 革兰 染色性 颜色 菌名