DB13T 1115_食品中军团菌的测定.pdfVIP

ICS 67. 100 X 1 6 DB13 、竺T 冫pi 北 省 地 方 标 准 DB13/T 1115-2009 食品中军团菌的测定 Determination of Legionella bacteria in food 最新的标准规范 2009-05-27发布 2009-06-11实施 河d 匕省质量技术监督局 发布 DB13/ T 1115- 2009 月 i j 吕 本标准参照工SO 11731-1998 《军团菌的检测方法（英文版）》制定。 本标准由河北省质量技术监督局提出并归口。 本标准起草单位：河北省食品安全重点实验室、河北省食品质量监督检验研究院。 本标准主要起草人：周正、张岩、周巍、刘辰魁、康素芬、刘东、穆燕魁。 最新的标准规范 DB13/ T 1115- 2009 食品中军团菌的检测方法 范围 本标准规定了食品中军团菌的检验方法。 该方法适用于饮用水中军团菌的检验。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 军团菌Legionella 杆形菌，宽度0. 3-0. 9林m，长度为2-20 ¦Ìm以上，不形成内孢子或小囊，无英膜，不产酸，革兰氏 染色阴性，借一两根或以上直的或弯曲的极鞭毛和侧鞭毛可以运动，偶尔可见无动力菌株。需氧，生长 时需L一半胱氨酸和铁盐。氧化酶阴性或弱阳性，硝酸盐还原试验阴性，尿素酶阴性，液化明胶。细胞壁 中有支链脂肪酸。可从有机化合物中摄取营养，可利用氨基酸作为能量来源。不发酵碳水化合物，亦不 能使之氧化。可从地表水、泥土和热水及污染的湖水和河水中分离到本菌，但从土壤和动物中分离尚不 了解，对人有致病性，DNA的G+C mol％含量为39-43 % (TmBd) ¡ã 3 试剂 最新的标准规范 3. 1缓冲木炭酵母膏琼脂培养基（BCYE) 3. 2无L一半胱氨酸缓冲木炭酵母膏培养基（BCYE-Cys) 3.3选择性缓冲木炭酵母膏培养基（GVPC) ¡ã 4 仪器 4. 1恒温培养箱：36℃士1 ¡ãC o 4.2天平：感量0.1g0 4. 3无菌吸头。 4.4无菌试管。 4.5无菌锥形瓶。 5操作步骤 5. 1总则：如果液体样品军团菌的数量估计超过105，可以采用直接平板法。为了确保低于这个数量样 品中军团菌的检测，需采用浓缩技术。为了浓缩水样，可采用膜过滤法（(5. 2)或离心法（(5.3) ¡ã 5.2膜过滤法：如果样品是浑浊的、乳浊的或有颜色的，应采用离心法。采用膜过滤装置进行膜过滤， 采用直径47^-147 mm，孔径0.22 ¦Ìm和0.45¦Ìm的膜。过滤后的膜应放置在带盖的无菌容器中，可 用无菌剪刀剪碎，加5 mL-25 mL的无菌稀释液或无菌去离子水，不断摇动至少2 min。也可将容器 放入超声波中2^-10 min. DB13/T 1115-2009 5. 3离心法：取200 mL样品于300 mL-500 mL容积的离心瓶中，6 000 g离心10 min或3 000 g 离心30 min，保持温度在巧℃一25 ¡ãC，弃去上清液，将沉淀物悬浮在2 mL-20 mL无菌稀释液或 无菌去离子水中。 5. 4培养 5.