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全血胆碱酯酶活性的测定 有机磷农药organophosphorous pesticide 接触机会 毒作用机制 抑制体内胆碱酯酶（ChE）活性 诊 断 《职业急性有机磷杀虫剂中毒诊断标准》(GBZ-2002) 职业史 现场职业卫生调查 临床症状体征 实验室检查——全血胆碱酯酶（ChE）活性 诊断分级标准 全血ChE活性范围 急性轻度中毒---50%-70% 急性中度中毒---30%-50% 急性重度中毒---30%以下 实验目的 加深对有机磷农药中毒机制的认识 掌握全血ChE活性测定的意义 掌握全血ChE活性测定原理、方法 意 义 有机磷农药中毒的重要诊断指标 中毒者治疗后的效果观察指标 接触有机磷农药人员健康状况的动态观察指标 方 法 Asch-DTNB比色法（GBZ52） 三氯化铁比色法 溴麝香草酚蓝（B·T·B）比色法 纸片法 Biocheck法（便携式分析仪） 三氯化铁比色法 [原理] [器材] 刺针 一次性自控式微量吸管（20μl） 分光光度计 恒温水浴箱（37℃±0.5 ℃ ） [试剂] 磷酸盐缓冲液（PH=7.20） 碱性羟胺溶液 1∶2盐酸溶液 10%三氯化铁溶液 乙酰胆碱标准应用液（1ml含4μmol） [分析步骤] 1. 乙酰胆碱标准曲线的绘制 2. 样品测定 （2）各管加碱性羟胺4ml，立即振摇3min （3）各管加1∶2盐酸溶液2ml，振摇1min （4）各管加10%三氯化铁溶液2ml，摇匀，过滤 （5）测吸光度：λ——520nm，参比管——第1管 （6）绘制标准曲线 计 算 1.被水解 的乙酰胆碱吸光度= 对照管吸光度（B管）－样品管吸光度（A管） 2.查标准曲线，得出被水解乙酰胆碱（ μmol ） ---即0.02ml血经37 ℃，30min反应条件下的 胆碱酯酶活性绝对值C 3.胆碱酯酶活性相对值（%） 注意事项 采血前先准备好试管，加入磷缓 采血时严格消毒，用过的棉球、刺针集中放置 准确控制水浴温度和放置时间 加三氯化铁显色后，在20min内比色 参比管的溶液留用到最后 实验报告要求 [实验目的] [实验原理] [实验步骤] [实验结果] [分析与讨论] * * ——三氯化铁比色法 有机磷农药的简单回顾 全血胆碱酯酶活性测定概述 三氯化铁比色法 生 产 施 用 食 物 误 服、自 杀 使体内乙酰胆碱大量积聚，引发神经系统功能紊乱 乙酰胆碱 胆碱酯酶 有机磷农药 乙酰胆碱 胆碱酯酶 胆碱 + 乙酸 碱性羟胺 乙酰羟胺 HCl FeCl3 羟肟酸铁(棕红色络合物) 1.乙酰胆碱标准曲线的绘制 （1）取六只具塞试管，配制乙酰胆碱标准色列 4.0 3.2 2.4 1.6 0.8 0 乙酰胆碱含量（μmol） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 磷酸盐缓冲液（ml） 1 1 1 1 1 1 水（ml） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 乙酰胆碱标准应用液（ml） 6 5 4 3 2 1 管号 2.样品测定 A管（样品管） B管（对照管） 0.98ml磷缓 0.98ml磷缓 20ul血 20ul血 37℃水浴 5min 碱性羟胺4ml,振3min 乙酰胆碱标准应用液1ml 乙酰胆碱标准应用液1ml 37℃水浴 30min 碱性羟胺4ml,振3min 1∶2盐酸溶液2ml,摇1min 10%三氯化铁溶液2ml 摇匀、过滤、比色 浙江地区健康人胆碱酯酶活性绝对值 男：3.22 ±0.336 μmol 女：3.19 ±0.398 μmol *