飞秒激光双光子荧光显微系统的构建与应用.pdf

第４７卷　 第 １１期 哈　 尔　 滨　 工　 业　 大　 学　 学　 报 Ｖｏｌ４７ Ｎｏ１１ 　 　 ２０ １５年１１月 ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＨＡＲＢＩＮ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ ＯＦ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ Ｎｏｖ． ２０１５ 　 　 　 　 　 　 ｄｏｉ：１０．１１９１８／ ｊ．ｉｓｓｎ．０３６７⁃６２３４．２０１５．１１．００１ 飞秒激光双光子荧光显微系统的构建与应用 １ １，２ １ １ １ 秦一凡 ，李　 茜 ，夏元钦 ，刘　 斌 ，张　 盛 （１． 哈尔滨工业大学 可调谐（气体）激光技术国家级重点实验室，１５００８０ 哈尔滨； ２． 国家仪器仪表元器件质量监督检验中心，１１００４３ 沈阳） 摘　 要：为进行双光子荧光显微成像研究，搭建了一套飞秒激光光源双光子荧光显微成像系统．对超短脉冲锁模激光器的成 像优势、双光子激励饱和功率及系统分辨率进行了理论推导，利用飞秒激光器、显微镜、数据采集设备与控制装置及扫描控制 软件搭建了显微成像系统，并对Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｂ样品进行双光子荧光显微成像实验．结果表明：相同条件下，超短脉冲锁模激光 ５ 器的双光子荧光产率为连续光输出激光器的１０ 倍；采用ＵＰＬＳＡＰＯ６０ＸＯ型物镜时，双光子激励饱和功率为５０ ｍＷ，理论横向 和轴向分辨率为３０３ ｎｍ 与７２７ ｎｍ；该系统具有显微成像能力，且实际横向分辨率小于３ μｍ． 关键词：飞秒激光；双光子荧光；罗丹明Ｂ；显微成像 － － － 中图分类号：ＴＮ４３１２ 文献标志码：Ａ 文章编号：０３６７ ６２３４（２０１５）１１ ０００１ ０５ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｅｍｔｏｓｅｃｏｎｄ ｌａｓｅｒ ｔｗｏ⁃ｐｈｏｔｏｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ ｓｙｓｔｅｍ １ １，２ １ １ １ ＱＩＮ Ｙｉｆａｎ ，ＬＩ Ｑｉａｎ ，ＸＩＡ Ｙｕａｎｑｉｎ ，ＬＩＵ Ｂｉｎ ，ＺＨＡＮＧ Ｓｈｅｎｇ （１．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｎＴｕｎａｂｌｅ Ｌａｓｅｒ，Ｈａｒｂｉｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１５００８０Ｈａｒｂｉｎ，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｎｇ ａｎｄ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，１１００４３ Ｓｈｅｎｙａｎｇ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｂｙ ｕｓｉｎｇ ａ ｆｅｍｔｏｓｅｃｏｎｄｌａｓｅｒ ａｓｔｈｅ ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ ｓｏｕｒｃｅ，ａｔｗｏ⁃ｐｈｏｔｏｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ ｓｙｓｔｅｍｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｔｏ ｃｏｎｄｕｃｔ ｓｏｍｅ ｒｅｓｅａｒｃｈｅｓ ｏｎ ｔｗｏ⁃ｐｈｏｔｏｎ ｍｉｃｒｏｃｓｏｐｙ． Ｆｉｒｓｔｌｙ， ｔｈｅ ａｄｖａｎｔａｇｅ ｏｆ ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ ａｎ ｕｌｔｒａｓｈｏ