包涵体复性注意事项和常见问题解析.PDFVIP

活性蛋白整体方案 Active Protein Solutions 包涵体复性注意事项和常见问题解析 包涵体复性注意事项 1. 最适 pH值范围为 8.0-9.0之间 ； 2. 温度适宜选择 4℃ ； 3. 复性时间一般为 24-36小时 ； 4. 低分子化合物 如 L-Arg有助于增加复性中间产物的溶解度 ；脲、盐酸胍、烷基脲、以及碳酸酰胺类等 ，在非 变性浓度下是很有效的促进剂 ，都可阻止蛋白聚集 ；Tris对蛋白质复性有促进作用 ；EDTA 可以防止蛋白降解 ； 5. 首先要获得较高纯度的包涵体 ； 6. 包涵体溶解要彻底 ，一般应使溶解液体量较大 ，不要怕蛋白被稀释 ，要有助溶措施 ； 7. 透析前后均要离心 ； 8. 包含体要彻底洗涤干净 ，洗涤液中加入适量 Triton-X100 ； 9. 包含体溶解后装入透析袋在复性液中复性 ； 10. 复性完毕在低浓度的缓冲液中连续缓慢透析 12-24h ； 11. 复性率的测定时要据变性蛋白和非变性蛋