质粒DNA提取与电泳检测.pptVIP

目前，已发现有质粒的细菌有几百种，已知的绝大多数的细菌质粒都是闭合环状DNA分子(简称cccDNA)。细菌质粒的相对分子质量一般较小，约为细菌染色体的0.5%-3%,大小在1Kb-200Kb之间。 在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。人工构建的质粒可以集多种有用的特征于一体，如含多种单一酶切位点、抗生素耐药性等。 2。质粒DNA的提取： 已经提出过许多方法用于从细菌中提纯质粒DNA， 这些方法都含有以下3个步骤：  ◆ 细菌培养物的生长。 ◆ 细菌的收获和裂解 ◆ 质粒DNA的纯化。? 试剂: 1、质粒快速提取试剂盒 溶液1（SET缓冲液）、溶液2（Lysis Buffer)、溶液3（3M NaAc,Ph4.8)、结合缓冲液、漂洗液、洗脱缓冲液、吸附柱、废液收集管 2、电泳检测 TAE缓冲液、琼脂糖、Loading buffer、EB 仪器、耗材： 台式高速离心机、电泳仪、电泳槽、移液器、1.5ml Eppendorf管 (5)向吸附柱加入700ul漂洗液， 12000rpm离心30秒。倒掉废液，装回吸附柱。 (6)重复（5），再次12000rpm离心2分钟以完全去除漂洗液。 (7)回收质粒：将吸附柱移到一个新的1.5ml eppendorf管中，向吸附膜中央加入50ul 洗脱缓冲液（水浴预热至70度），溶解提