质粒DNA抽提纯化与检测.pptVIP

实验 提取质粒DNA的目的与意义 基因载体/基因克隆/基因工程： 在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。人工构建的质粒可以集多种有用的特征于一体，如含多种单一酶切位点、抗生素耐药性等。 提取方法概述 原理示意图 重组质粒的酶切反应 核酸电泳 核酸分子是两性解离分子，在pH8.0～pH8.5时，磷酸全部解离，使得核酸分子带负电荷，向电场正极移动。 质粒的三种构型 重组质粒双酶切电泳 点样： 小结 1．质粒的提取：碱裂解法分离纯化质粒DNA，利用质粒 DNA与染色质DNA变性与复性的差异。 2．质粒的酶切：限制性核酸内切酶可以识别特异 的DNA序 列，并切割双链DNA。本实验中EcoR I、Hind III将3.4 Kb的质粒双酶切为2.5 Kb和0.9Kb的两个片段。 3．电泳分析：利用不同的分子量的DNA片段在琼脂糖凝胶 中泳动速度不一样使其分离。 思考题 1. 碱裂解法分离纯化质粒DNA基本原理是什么？结合基本原 理分别讲述溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ发挥怎样的作用。 2. 实验操作中应注意哪些步骤？否则可能产生怎样的后果？ 3. 如何通过电泳分析判断得到的质粒DNA的质量？ 4. 如果质粒DNA中残留有蛋白质或RNA，电泳后会出现什么结 果？ * * 分子生物学实验（综合性） 质粒DNA的抽提、酶切及电泳鉴定