精品模版-化学及材料科学学院——西北大学.pptVIP

色谱工作站 物质的量与峰高（峰面积）成正比 药物方面 生化方面 环保方面 药品预处理：片剂、油膏、水剂等 体液：血、尿、脊椎液、唾液等 抗菌素：青霉素 、甾族(激素) 蛋白质分析 肽类分析 氨基酸分析 核酸分析 农药残留分析：含氯、含磷农药等 致癌物质：霉素、亚硝胺、苯并芘等 水质分析：内分泌污染物等 高效液相色谱法的应用 内标法 在样品中加入一定量、色谱柱可分离、试样中其它组分峰不干扰的标准物质。 测定该内标物和待测组分的峰面积或峰高，即可求出待测组分在样品中的百分含量。 原 因 需要测定试样中的某几个组分，或试样中所有组分不可能全出峰时，采用内标法。 方 法 葛根素具有较强的非极性，用反相液相色谱法分析 葛根素在250 nm具有最大吸收峰，采用紫外检测器检测 三、实验原理 已知化合物 纯度高、量准确 性质类似，如同系物 充分分离 内标物的选择 定量校正因子计算 内标物标准溶液 待测物标准溶液 样品溶液 1. 溶液配制 内标液 准确称取0.6250 g对羟基苯甲醛于500 mL容量瓶中，用甲醇稀释至500 mL，得1.25 mg/mL的内标溶液。 葛根素标准溶液 准确称取25 mg葛根素纯品（99%）于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀备用。 四、实验步骤 准确移取上述标准溶液1.00 mL于10 mL容量瓶中，加1.00 mL内标液，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即为0.05 mg/mL的标准溶液。 样品溶液 取2.00 mL葛根素注射液于500 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀 准确吸取上述溶液2.00 mL及1.00 mL内标液于10 mL容量瓶，用甲醇稀释至刻度，摇匀。 2. 色谱条件和测定方法 色谱条件 色谱柱：VP-ODS(150?4.6mm) 流动相：甲醇/0.1%柠檬酸=40/60（体积比） 流量：1.00 mL/min 检测波长：250 nm 进样量：10μL 依次测定对羟基苯甲醛内标液、葛根素标样在该色谱条件下的峰面积，记为A对（标） 、A葛（标） 测定样品溶液中对羟基苯甲醛内标液及葛根素在该色谱条件下的峰面积，记为A对（样） 、A葛（样） 注意事项 内标物必须定量加入； 检查流速、流动相组成和检测波长等参数设定是否正确； 进样前先设定好分析文件的储存位置和名称； 进样阀在load状态时加载样品，然后将转子选到inject状 态以将样品引入到分离系统中； 注意流动相的剩余量，以免吸空； 注意高压泵的压力变化情况。 确定样品中各组分的出峰顺序 推导内标法测定样品含量的计算公式 求取待测样品中葛根素的含量 五、结果处理 1. 什么是归一化法、内标法和外标法？三种方法的优缺点各是什么？ 2. 绝对和相对校正因子的物理意义是什么？推导本次实验的计算公式。 3. 查阅一篇有关HPLC的综述文献。 六、思考题 七、实验延伸 蛋白质是重要的生物大分子，是体内生物功能的执行者。高效液相色谱法是用于制备高纯度蛋白质和多肽等生物制品的主要方法。我院耿信笃教授领导的现代分离科学研究所在蛋白质分离纯化领域具有深厚的基础，并进行与之有关的学科前沿研究。 色谱柱是液相色谱的心脏，因此高性能色谱填料的开发一直是色谱领域的主要研究内容之一。我院卫引茂教授课题组在高选择性和高容量色谱分离介质制备方面进行了一系列创新性研究工作。 参考文献 1. 彭兆斌, 范艳冰，汤婉. 高效液相色谱法测定颈康胶囊中葛根有效成分葛根素的含量[J]. 世界中西医结合杂志, 2009,4(7):480-482 2. 王红团,吉训恋. HPLC测定健听颗粒中葛根素含量[J]. 中国中药杂志, 2008,33(15):1916-1917 3. 冯维希,胡虹,张爱丽等. HPLC法测定云台山葛根不同部位葛根素的含量[J]. 西北药学杂志, 2007,22(3):110-111 基础化学实验IV（仪器分析实验） 高效液相色谱法测定葛根素注射液中葛根素含量 实验技能训练要点 高效液相色谱仪的使用（第一次训练） 进样阀的使用（第一次训练） 内标法定量过程和计算方法（第一次训练） 一、实验目的 二、高效液相色谱法简介 三、实验原理 四、实验步骤 五、结果处理 六、思考题 七、实验延伸 掌握高效液相色谱法的基本原理 熟悉高效液相色谱仪各主要部件及其作用 熟悉高效液相色谱仪的使用方法