临床药理学-中国医科大学医学教育技术中心.PDFVIP

临 床 药 理 学 实 验 手 册 中国医科大学临床药理教研室 临床药理学实验手册目录 一、 总论………………………………………………………………………. 1、生物样品中药物浓度测定方法的建立 2 、高效液相色谱法 3、生物样品的预处理 二、 各论 1、苯妥英钠吸收试验 1） 家兔给药及血样采集 2 ） 血样处理 3 ） HPLC 检测 4 ） 数据处理………………………………………………….. 2 、苯妥英钠分布试验 1） 大鼠灌胃及组织采集 2 ） 组织样品处理 3 ） HPLC 检测及数据处理…………………………………………….. 3、苯妥英钠代谢试验 1） 肝微粒体提取 2 ） 肝微粒体蛋白浓度测定 3 ） 苯妥英钠体外代谢反应 4 ） HPLC 检测及数据处理…………………………………………….. 总 论 生物样品中药物浓度测定方法的建立 一、样品制备方法及检测技术的初步拟定 根据药物理化性质初步拟定生物样品的制备方法。根据药物的剂量、有效血 药浓度水平、受试对象等初步确定灵敏度以及相适应的检测技术，如紫外、荧光、 原子吸收分光光度法、GLC、HPLC 、RIA 或微生物测定法等。 二、生物样品预处理方法的初步拟定 根据待测药物的理化性质拟定其生物样品的处理方法。液-液萃取为最常采 用的分离提取方法，适用于有机酸、有机碱等脂溶性成分。另外，也可采取固相 提取的方法使样品富集。 三、方法特异性的测定 首先以不含药物的空白组织或体液按所拟定的方法测定，得组织空白值，如 该值接近于零，说明组织中内源性物质不干扰测定。然后给受试对象一定剂量药 物，不同时间收集血样及尿样，同法测定，应能证明所测物质为待测物质。如待 测物为原形药，应能区分代谢产物，即不受代谢产物干扰。在建立方法时，除应 获原形药标准品外，还应合成该药在体内可能的主要代谢产物，将其代谢产物标 准品与原形药标准品一同加入生物样品中按拟定的方法操作，应能证明测定的原 形药和代谢物能够相互区分。如为 HPLC 或 GLC 法，原形药与代谢物的色谱峰 应不相重迭。如建立的方法用于 TDM，还应注意到测的药物应不受临床同时伍 用的其他药物干扰。如方法中使用内标物，必须注意与内标的区分。 特异性是方法建立的最关键步骤，只有特异性达到要求后，测得的血、尿药 浓度才有意义，进一步考查方法的其他要素才有必要。 四、标准曲线绘制及线性关系测定 首先配制一系列不同浓度的药物水溶液或醇