5种制备sirnas的方法.pptxVIP

siRNA design;5种制备siRNAs的方法： 体外制备： 化学合成 体外转录 用RNase III 消化长片断双链RNA制备siRNA ??? 体内表达： siRNA表达载体或者病毒载体在细胞中表达siRNAs PCR制备的siRNA表达框在细胞中表达 ;1. 化学合成;体外转录是一种性价比高的筛选siRNAs的好方法。更重要的是采用这种方法能够比化学合成法更快的得到siRNAs。 这个方法的不足之处是实验的规模受到限制，虽然一次体外转录合成能提供足够做数百次转染的siRNAs，但是反应规模和量始终有一定的限制。而且和化学合成相比，还是需要占用研究人员相当的时间。体外转录得到的siRNAs只要较低的浓度就可以达到化学合成siRNAs较高浓度得到的效果 Best for: 筛选siRNAs，特别是需要制备多种siRNAs，化学合成的价格成为障碍时。 Not suitable for: 实验需要大量的，一个特定的siRNA，长期研究。 ;选择通常是200—1000碱基的靶mRNA模版，用体外转录的方法制备长片断双链dsRNA? RNase III (or Dicer) 在体外消化，得到一众siRNAs 除掉没有被消化的dsRNA siRNA混合物直接转染细胞 ;体内表达;siRNA表达载体 ;siRNA表达框架 (SECs) ;