吡嗪二甲酰胺桥联芹菜素铜配合物的合成及其DNA切割活性-应用化学.PDF

第３４卷 第１０期 应 用 化 学 Ｖｏｌ．３４Ｉｓｓ．１０ ２０１７年１０月 　　　　　　　ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＡＰＰＬＩＥＤＣＨＥＭＩＳＴＲＹ　　　　　　　 Ｏｃｔ．２０１７ 吡嗪二甲酰胺桥联芹菜素铜配合物的 合成及其ＤＮＡ切割活性 ａ ｂ ａ ａ ａ ａ 何大青 　蒋尚飞　陈　煜 　文丽君 　唐一迪 　李芯宇 ａ ｂ （海南医学院 药学院；基础医学与生命科学学院　海口５７１１９９） 摘　要　以５，６二甲基２，３吡嗪二甲酰胺和芹菜素为混合配体，与醋酸铜以溶剂热法合成吡嗪二甲酰胺桥 联芹菜素铜配合物；该配合物通过紫外光谱、红外光谱、差热热重分析及Ｘ射线粉末衍射（ＸＲＤ）等进行表 征。采用酶切实验及琼脂糖凝胶电泳法，研究该铜配合物对ＤＮＡ的切割活性；凝胶电泳结果表明，不加入任 何还原剂时，当质量浓度为００５９２ｇ／Ｌ时，该配合物对超螺旋ｐＢＲ３２２ＤＮＡ表现出显著的ＤＮＡ切割活性，且 随质量浓度的增加，切割活性增强。这为人工核酸酶的研究提供了例证及开阔了思路。 关键词　吡嗪二甲酰胺；芹菜素；配合物；合成；ＤＮＡ切割活性 中图分类号：Ｏ６２２．６　　　　　文献标识码：Ａ　　　　　文章编号：１００００５１８（２０１７）１０１１７２０５ ＤＯＩ：１０．１１９４４／ｊ．ｉｓｓｎ．１００００５１８．２０１７．１０．１７０１２４ 人工核酸酶在基因药物设计和分子生物学研究领域具有重要的科学意义，因此人工核酸酶的设计 ［１］ 和酶模拟方面的研究引起了广泛关注并取得了重要进展 。由于与核酸有关的多种天然酶的活性部位 含有两个或两个以上协同作用的金属离子，因此科研人员对多核金属配合物作为核酸模拟酶进行了广 ［２５］ 泛的研究 。研究表明，双核或多核铜配合物分子中含有两个或两个以上的铜金属中心，增强了配合 ［４］ 物进行ＤＮＡ切割时的选择性和切割效率 。５，６二甲基２，３吡嗪二甲酰胺是一个优良的多齿配体，能 ［６８］ 形成多种金属配合物 ，芹菜素是一种天然抗氧化剂，分子中也有多个配位氧原子，本文尝试设计合成 以５，６二甲基２，３吡嗪二甲酰胺为桥联配体，芹菜素为端基配体的双核铜配合物，在紫外、红外、热重、 Ｘ射线粉末衍射等结构表征的基础上考察该配合物在不加任何还原剂的情况下，对超螺旋ｐＢＲ３２２ＤＮＡ 的切割活性，旨在发现具优良活性的人工金属核酸酶。 １　实验部分 １．１　仪器和试剂 ＤＦ１０１Ｓ型集热式恒温加热磁力搅拌器、ＳＨＺＤ（ ）型循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限公 Ⅲ 司）；ＤＺＦ６０２１型真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；ＴＥＮＳＯＲ２７型傅里叶变换红外光谱仪（德 国Ｂｒｕｋｅｒ公司）；ＵＶ１００Ｐ型紫外可见光光度计（上海凤凰光学科仪有限公司）；Ｑ６００型热重分析仪 （ＳＤＴ，美国ＴＡ仪器公司）；Ｄ８Ａｄｖａｎｃｅ型Ｘ射线衍射仪（德国布鲁克公司）。凝胶电泳实验在Ｔａｎｏｎ ＥＰＳ３００型电泳仪（上海天能科技有限公司）上完成。 酶切实验用的是加了１０ｍＬ核酸染料的ＧｏｌｄＶｉｅｗＩ型的ＴＢＥ琼脂糖凝胶（北京瑞达恒辉科技发展 有限公司）；ｐＢＲ３２２ＤＮＡ购自ＭＢＩＦｅｒｍｅｎｔａｓ；２，３二甲基５，６二氰基吡嗪（９９％），美国Ａｌｄｒｉｃｈ公司； 芹菜素（纯度＞９５％），陕西慧科植物开发公司；三羟甲基氨基甲烷（Ｔｒｉｓｂａｓｅ），美国ＲＴ公司；丙酮、 ＮａＯＨ、３０％ＨＯ、甲醇、一水合乙酸铜（Ｃｕ（ＣＨＣＯＯ）·ＨＯ）、无水乙醇，均为分析纯试剂，购自广州化 ２ ２ ３ ２ ２ 学试剂厂。 １．２　吡嗪二甲酰胺的合成 参考文献［６］方