《第九章植物离体繁殖》-课件设计（公开）.pptVIP

四、离体快繁商业性生产的范围及应用 1．用于稀缺或急需良种植物的繁殖 2．用于茎尖脱毒及无病毒苗木试管快速繁殖 3．用于自然界无法用种子繁殖或难以保持后代一致的三倍体、单倍体及基因工程植株的快速繁殖 4．濒临植物的拯救 5．用于种质的试管保存及交换 * 园艺植物种苗工厂化生产 * * * * 兰科植物生产 * 无菌苗快速繁殖 * 无菌苗驯化 * * 五、商业化生产应注意的问题 1.污染 污染是指在组培过程中，由于真菌、细菌等微生物的侵染，在培养容器中滋生大量菌斑，使培养材料不能正常生长和发育的现象。 * （1）污染发生原因 ①培养基及各种接种器皿灭菌不彻底； ②外植体灭菌不彻底； ③操作时人为带入； ④环境不清洁； ⑤超净工作区域不清洁。 * （2）控制污染的措施 ①灭菌彻底：灭菌锅压力1.055～1.406 kg／cm2、温度为121～126℃，应保持灭菌时间20～30min； ②操作正确：接种器具每次使用后应用酒精灼烧；操作人员接种时应用75％的酒精擦拭双手和培养瓶表面，操作区内不要放入过多待用培养瓶以防止气流被挡住； ③保持操作区环境清洁：接种室环境、超净工作台、培养室环境 ④及时淘汰污染的外植体材料，若材料有限，可进行二次灭菌 * 2.遗传稳定性 （1）影响遗传稳定性的因素 ①基因型。培养材料的基因型不同，发生变异的频率也不相同。 ②继代次数。试管苗继代培养次数和时间是造成遗传变异的关键因素，一般随继代次数和时间的增加，变异频率呈上升趋势。 ③器官发生方式。离体器官5种发生方式中，以茎段、茎尖等形成的丛生芽、单芽、不定芽的方式繁殖，不易发生变异或变异率极低。 * （2）降低遗传变异的措施 ①选用不易发生遗传变异的基因型材料； ②缩短继代时间，限制继代次数，继代一定时间后，重新开始外植体的继代培养； ③采用不易发生遗传变异的增殖途径； ④采用适当的生长调节物质和较低的浓度，减少或不使用易引起诱变的物质，及时剔除生理和形态异常苗。 * 3.玻璃化 是指组织培养过程中的特有的一种生理失调或生理病变，表现为叶和嫩梢呈水浸透明或半透明水渍状。 * 原因： 玻璃化的起因是细胞生长过程中的环境变化。试管苗为了适应变化了的环境而呈玻璃状。 1.激素浓度 激素浓度增加尤其是细胞分裂素浓度提高(或细胞分裂素与生长素比例高)，易导致玻璃化苗的产生。 2.琼脂浓度 培养基中琼脂浓度低时玻璃化苗比例增加，水浸状严重，苗向上长。随着琼脂浓度的增加，玻璃化苗比例减少。 3.温度 适宜的温度可以使试管苗生长良好。温度与玻璃化程度呈正相关。 6.离子水平 如果培养基中离子种类及其比例不适宜该种植物，玻璃化苗的比例就会增加。NH4+ 含量高易引发。 4.光照时间 大多数植物在10～12h/d、光照强度1500~2000lx 下都能生长良好。高温加上光照不足加速玻璃化。 5.通风条件 试管苗生长期间，要求有足够的气体交换，气体交换的好坏取决于生长量、瓶内空间、培养时间和瓶盖种类。 解决办法：提高琼脂的浓度；改善容器的通气状况；调解培养基组分：减低NH4＋可以减少玻璃苗，或加入根皮苷和Ca2＋的浓度，都可减少玻璃苗。 4.褐化 褐化是指外植体或培养材料向培养基中释放褐色物质，致使培养基和培养材料逐渐变褐而死亡的现象。 * 影响褐化的因素 1.植物种类和品种 2.外植体的生理状态 3.培养基的成分 4.培养条件 解决办法： 1.取材季节：冬春季节 2.选择合适的外植体：分生能力强 3.在培养基中加入抗氧化剂（抗坏血酸，柠檬酸，半脱氨酸，二硫苏糖醇，PVP） 4.吸附剂：活性炭 5加快继代转瓶速度 5.黄化 黄化是指试管苗幼苗整株失绿，全部或部分叶片黄化、斑驳的现象。 * （1）黄化发生的影响因素 ①培养基成分。培养基中铁元素含量不足，矿物质营养不均衡，激素配比不当，糖用量不足或已耗尽。 ②培养条件。培养瓶通气不良，乙烯含量升高，温度不适，光照不足。 ③pH。pH变化过大。 ④抗生素类。培养基中添加一些抗生素类物质，如青霉素、链霉素、头孢霉素等。 * （2）控制黄化发生的措施 ①检查培养基配制过程，保证培养基成分正确添加； ②调节培养基组成和pH； ③控制培养室温度，增加光照，使用透气瓶塞改善瓶内通气情况； ④减少或不用抗生素物质。 * Thanks！ * * * * * * * * 三、芽苗生根 将单个芽苗转移到生根培养基或适宜环境中诱导生根。 1.离体生根（试管内生根） 降低无机盐浓度（1/2MS或者1/4MS），减少或不需要细胞分裂素，增加生长素的浓度。 对有些植物，如果芽苗在含有生长素的培养基中生长1～2d，再转移至无生长素的培养基中，或芽