Fra1在乳腺癌细胞中高表达原因及其启动子高转录活性的分子机制研究.docVIP

Fra-1在乳腺癌细胞中高表达原因及其 启动子高转录活性的分子机制研究 周秋媛李虹王红莉奎违徐艳坐 湖北姗医鵬理科 湖北 姗医鵬理科 目的探讨Fra-l在乳腺癌细胞屮高表达原因，以及Fra-1启动子高转泶活性的 分子机制。方法选取2株人乳腺癌细胞株MDA231和MCF-7、1株人脐静脉内皮 细胞株ECV304进行研宄。采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应法和蛋白质印 迹法分别检测Fra-lmRNA和蛋白的表达情况;构建Fra-1双荧光报告载体，检测 Fra-1启动子转录活性;构建Fra-1启动子短截报告载体及相关位点的突变型报 告载体，检测短截报告载体及突变型载体转录活性;通过凝胶迁移阻滞试验观察 生物素标记的特异性探针与活化因子蛋白-1 （API）结合情况。结果乳腺癌细胞 株MDA231和MCF-7中，Fra_l的mRNA和蛋白的相对表达量及其启动子全长报告 载体转录活性均高于人脐静脉内皮细胞株ECV304,差异有统计学意义 （P〈0. 05）:在构建的一系列Fra-1启动子短截报告载体中，只有pGL3B_256活性 明显下降，差异有统计学意义（P〈0.05） :API突变型报告载体pGL3B-M2、特异 性蛋白1及API双突变报告载体PGL3B-M3活性明显低于野生型报告载体 PGL3B-M1,差异有统计学意义（P0.05）:凝胶迁移阻滞试验观察到生物素标记 的特异性探针与