il1ra发酵工艺研究论文.docVIP

由于K目前进行到临床阶段，属国家一秃新药，所以以K来代替药品木身的名称。 重组人K发酵工艺研究 ? k是一种销艮大发展前景的种族蛋白质药物。 自Arend等1990年克隆出人k的cDNA以来，各国学者都在对k进行更为全面、 深入的研究。同时，众多制药厂商也都在致力于k的开发，美国FDA己批淮k治疗类 风湿性关节炎的药物正式上市。而在我国，虽然早在90年代初期就已构建出了 k的表达 载体，实验室工作也己完成，但至今尚未完成产业化过程。 我们在北大马大龙教授领导的实验室工作基础上，进行了 k中试工艺的研究。发 酵是中试工艺的第一步，也是决定每批次产量的关键性一步。 由于k用于治疗的有效剂量较大，为能最大限度生产出k,须建立适当的发酵工艺, 提高单位体积菌密度和FI的蛋白表达量是解决问题之急所，以达到适合工业化生产的要 求。 通过单一因素实验法以及正交实验法，实现了由摇瓶培养到30L放大生产。该发 酵工艺研究的目的是每批蛋白表达量在20%以上，并获得较高的单位湿菌量。采用由三 角瓶摇瓶实验到5L发酵罐发酵再放大到30L发酵罐的渐进的工艺研究，最终实现30L 发酵罐连续补料流加的分批式发酵达到较高水平。 .材料与方法 (-).实验材料 菌种： 大肠杆菌POP2136,介C1857棊因，编码温度敏感的入阻遏蛋白。 质粒： pKpL-hL大肠杆菌质粒(北医大免疫室构建)，含孔启动子，温控表达