人教版高中生物选修一 dna的粗提取与鉴定 名师公开课省级获奖课件（29张）.pptVIP

⑧8个步骤：提取→过滤→溶解→过滤→再溶解→再过滤→提纯→鉴定。 旁栏思考题 答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA。 1．为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 2．加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。 3．如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ 答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。 4．此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质。 5．为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？ 答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。 6．方案二与方案三的原理有什么不同？ 答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。 （二）练习 1．答：提取DNA的第一步是材料的选取，其目的是一定要选取DNA含量较高的生物材料，否则会由于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困难；第二步是DNA的释放和溶解，这一步是实验成功与否的关键，要尽可能使细胞内的DNA全部溶解；第三步是DNA的纯化，即根据DNA的溶解特性、对酶及高温的耐受性的不同等特性，最大限度地将DNA与杂质分开；最后一步是对DNA进行鉴定，这是对整个实验的结果的检测。 2．答：提取蛋白质比提取DNA的难度大。这是因为，与DNA相比，蛋白质对温度、盐浓度、pH等条件要敏感得多，很容易失活；并且蛋白质的空间结构多种多样，理化性质各不相同，使得蛋白质的提取没有一种统一的方法，只能根据特定蛋白质的特性摸索提取的条件，设计特定的方法。 专题5 DNA和蛋白质技术 课题1 DNA的粗提取与鉴定 课题目标 1、尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取。 2、了解DNA的物理化学性质 3、理解DNA精提取以及DNA鉴定的原理 课题重点与难点 课题重点： DNA的粗提取与鉴定方法 课题难点： DNA的粗提取与鉴定方法 想一想？ ①DNA主要存在于细胞核中，如何选取具核的生物组织作为实验材料？ 取鸡血细胞液（其红细胞椭圆具核，猪、羊、狗等哺乳动物红细胞无核），或取新鲜猪肝、菜花、洋葱等材料。虽然在细菌的转化实验中提取的是无核细胞中的DNA，但一般而言，均是从具核的生物材料中提取DNA。当然，在提取出的DNA中也含有一定量的胞质DNA，即线粒体DNA和叶绿体DNA。值得推介的材料是洋葱，取材容易，操作简便，效果明显。将家用加盐洗洁精与洋葱碎屑混合研磨并过滤后，再加酒精，微摇后即出现白色的毛絮状DNA混合物。 ②如何除去核外的核膜和质膜，对于植物细胞又如何破壁？ 使红细胞溶血破膜以及化学药剂十二烷基磺酸钠 SDS（洗洁精的主要成分）或三氯乙酸溶膜。在低渗溶液中，如加蒸馏水使血细胞过度渗透吸水直至破裂，同时用玻棒加速血细胞及核破裂，经一级过滤后滤出液为DNA核蛋白和RNA核蛋白。对于菜花、洋葱等植物材料，在研磨破坏其细胞壁的同时，可考虑适量加入乙二胺四乙酸EDTA以防止DNA酶解。 ③细胞核中除DNA外，还有RNA，且DNA以核蛋白体DNP的形式存在。那么，如何使DNA和RNA分开，又如何使DNA和蛋白质分开？ 利用DNA和RNA溶解度的不同析出DNA。在浓氯化钠溶液（2 mol/L）中，DNA核蛋白的溶解度很大，而RNA核蛋白的溶解度很小。在稀氯化钠溶液（0.14mol／L）中DNA的溶解度最低，蛋白质的溶解度很高而出现盐溶现象，经二级过滤后滤出液主要为DNA粗制品。 ④如何去除杂质物质使DNA更加纯化？ DNA不溶于酒精，经三级过滤后，再利用乙醇沉淀法使其他物质溶于酒精而进一步纯化DNA。 ⑤如何验证提取物主要是DNA成分？ 二苯胺或甲基绿鉴定法 即DNA遇二苯胺（沸水浴）被染成蓝色，遇甲基绿被染成蓝绿色，且颜色的深浅与DNA纯化程度有关。在此过程中设计对照实验，以增强实验中二苯胺对DNA专一性显色结果的可信度。 以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取 本实验用鸡血细胞做实验材料有两个原因。 一是