药物分离纯化技术制备色时谱分离技术.ppt

分离科学中的热力学 分离科学中的热力学 常规柱色谱的操作 (1)装柱：干法和湿法； (2)上样：液体上样和拌样上样，样品带尽可能窄； (3)洗脱：始终保持洗脱剂液面高于柱床表面，可梯度洗脱； (4)流分收集：常采用固定体积收集法，结合TLC检验； (5)样品回收：减压蒸馏或重结晶 制备色谱技术 干柱柱色谱 干吸附剂，待分离样品配成浓溶液或吸附于少量填料上上样，洗脱液接近色谱柱底部时停止洗脱，挖出或切开色带。 制备色谱技术 时间短 节省试剂 玻璃柱 尼龙柱 减压柱色谱 减压促进溶剂流动。 制备色谱技术 与加压相比，变换溶剂更加方便； 吸附剂高度一般不超过5cm； 分离过程中，逐渐增加洗脱剂中高极性溶剂的比例，开始阶段增加幅度较小(1%,2%,3%)，随后幅度逐步增大(5%,10%,20%等)，通常收集20-25个流分即可将所有成分洗脱。 制备色谱技术 加压液相柱色谱技术 (1)快速色谱法：约0.2MPa； (2)低压液相色谱法：0.5MPa； (3)中压液相色谱法：0.5～2MPa； (4)高压液相色谱法：2MPa； 制备色谱技术 加压液相色谱制备分离方法的建立： (1)采用薄层色谱确定分离条件。 对于快速和低压色谱，常用薄层色谱选择分离条件。 硅胶薄层色谱确定正相色谱条件，反相硅胶薄层色谱确定反相色谱条件，一般选择Rf不大于0.3且具有较好分离效果的展开剂。 制备色谱技术 (2)采用分析HPLC来确定分离条件。 对于中压和高压色谱则需要用分析HPLC条件进行选择。 优化条件时，寻求较小的容量因子(k’3)为原则，分离度需高于分析LC所需要的水平，满足制备型LC采用过载模式来提高效率。 制备色谱技术 进样量的影响 实验室规模的制备，轻微过载，优点： (1)便于回收高纯度目标成分，纯度99%； (2)纯品几乎完全回收，回收率95%； (3)分离程序简单，不需要为了得到纯品进一步分析所得到的组分。 制备色谱技术 过载：低浓度时，进样量增加使得容量因子改变超过10％ 浓度过载和体积过载 制备色谱技术 K不变，线性 结果可预测 K变化，非线性 结果难预测 边缘切割与循环色谱分离 －－分离不佳时 制备色谱技术 密闭进样器是将流经检测器的柱流出液通过多通阀连至泵的入口； 交替柱循环装置是连接两根色谱柱，通过阀门将第二根色谱柱切割得到的样品再加到第一根色谱柱上循环分离。 中心切割 制备色谱技术 适当损失组分，但避免色谱峰两端微量组分的污染。 制备加压色谱设备要求 (1)泵：流量大，压力不需要太大； (2)进样器：大样品环六通阀，环管细而长而不是短而粗，样品溶液低浓度，大体积； (3)色谱柱：装填均匀常采用柱床压缩技术即径向压缩和轴向压缩； (4)检测器：不需要高灵敏； 制备色谱技术 快速色谱法 简单易行 制备色谱技术 低压和中压色谱法 第七章 制备色谱技术 制备HPLC 制备色谱技术 更大 大 5-50 1 进样量/mg 更低 10 25-50 25 大制备柱 低 5-20 25-50 20-25 制备柱 15000 5-10 25-50 8-10 半制备柱 50000 3.5, 5 25 4-5 分析型柱 柱效 填料粒径/?m 长度/cm 内径/mm 参数 生产级的HPLC (1)溶剂花费是最大成本，昂贵、毒性、难处理溶剂不使用； (2)填料易得，性能好，重现性好； (3)溶剂回收再用； (4)直径大于5cm的色谱柱需专门设计，保证床层稳定，避免高压破坏。 制备色谱技术 模拟移动床色谱(SMB) 通常的色谱存在下列问题： (1)不能连续操作； (2)溶剂和分离材料利用率低； (3)流出组分被高度稀释； SMB同样的分离材料，生产力增加60倍，溶剂消耗量减少80倍。 制备色谱技术 * * 制备色谱技术 制备色谱的特点： 最有效的制备性分离技术； 实验室规模、小批量生产、产业化制备； 不同领域产品量不一样，阐明化学结构和生物活性，30－50mg足够，分析用标准品100mg以上，有机合成通常需要g级以上； 薄层色谱 柱色谱 制备色谱技术 制备薄层色谱法 设备简单，操作方便、分离快速、灵敏度及分辨率高； 切割谱带更加方便； 自动化：自动点样仪、自动程序展开仪、薄层扫描仪、多种强制流动技术、多种联用技术如傅立叶变换红外、拉曼、质谱等。 制备色谱技术 常规制备薄层色谱PTLC 薄层板制备 为了增大上样量，增加了吸附剂用量。 固定相：硅胶、氧化铝、纤维素、C2、C18等反相健合硅胶 支撑：玻璃板或铝箔 平均25?m, 5~40 ?m 硅胶H、硅胶G、硅胶F254、硅胶F36