罗格列酮对人乳腺癌mdamb231细胞的体外抗肿瘤作用.docVIP

罗格列酮对人乳腺癌MDA MB 231细胞的体外抗肿瘤作 姓 名： 2014年6月25日 ：章涛余华荣杨贵忠 刘颖菊杨俊卿蒋建新周岐新 B的：研究过氧化物酶体增殖物激活受体Y (PPARy)激动剂 罗格列酮对人乳腺癌细胞MDA MB 231体外生K:影响，以评价其在人乳腺癌 治疗上的应用潜力.方法：噻唑蓝(MTT)法检测罗格列酮对MDA MB 231细 胞体外生长抑制作用；应用PPARy拮抗剂GW9662,分析罗格列酮对 MDA MB 231细胞增殖影响与PPARy受体关系；流式细胞仪分析细胞周期， Annexin V FITC和TUNEL法检测细胞凋亡.结果：罗格列酮干预下 MDA MB 231细胞G0/G1期比例上升，而S期比例下降，呈量效关系抑制 其生长，IC50=5.2 pmol/L. PPARy拮抗剂GW9662可部分逆转罗格列酮对 MDA MB 231细胞增殖抑制作用(P0.05); 100 pnol/L罗格列酮还可诱导 MDA MB 231细胞凋亡，TUNEL法检测的凋亡率(18.4士3.1)%与Annexin V F1TC法检测的结果一致[(16.6土2.7)%](P0.05).结论：罗格列酮通过PPARj 介导，使MDA MB 231细胞G1期阻滞而抑制其增殖，高浓度时还可诱导其 发生凋亡，罗格列酮有望成为治疗乳腺癌的有效药物. 关键词 过氧化物酶体增殖物激活受体Y罗格列酮抗肿瘤药乳腺肿瘤 MDA MB 231 细胞 0引言 由罗格列酮、毗格列酮和环格列酮等组成的噻唑烷二酮类 (thiazolidinedione, TZD)人工合成过氧化物酶体增殖物激活受体y (peroxisome proliferator activated receptor y, PPARy)激动剂己被广泛应用于糖尿病的临床治 疗当中[1].近年来的研宄显示，TZD等PPARy激动剂可抑制多种肿瘤细胞的 增殖并促进其凋亡，激活PPARy受体极有希望成为治疗多种恶性肿瘤的新途径 [2].但0前为止，尚无罗格列酮对人MDA MB 231乳腺癌细胞体外抗肿瘤 的系统研究报道.鉴于此，我们就细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡等方面探讨罗 格列酮对MDA MB 231细胞的体外生物学效应，为未来临床抗肿瘤应用提供 理论依据. 1材料和方法 1.1材料MDA MB 231人乳腺癌细胞株购自中科院上海细胞库.罗格列 酮购自重庆康尔威药业公司（批号:2005 1,纯度0.99）；四甲基偶氮唑蓝（MTT）、 PPARy受体拮抗剂GW9662购白Sigma公司；TUNEL细胞凋亡原位检测试剂 盒购自南京凯基生物；Annexin V FITC Kit为Beckman Coulter公trj产品； RPMI 1640培养基、小牛血清购自HyClone公司；其它试剂均为分析纯.Coulter counter细胞计数仪（Beckman Coulter公司）；Safire全波长酶标仪（TECAN公 司）；FACS Calibur流式细胞仪（Becton Dickinson公司）.由于罗格列酮和 GW9662难溶于水，用DMSO制成0.1 mol/L的母液，-20°C冰箱保存备用. 1.2方法 1.2.1细胞培养MDA MB 231细胞培养于含100 mL/L小牛血清的RPMI 1640培养基中，常规加入青霉素（105U/L）与链霉素（100mg/L）,于37°C,50 mL/L CO2培养箱中培养. 1.2.2MTT检测细胞增殖抑制率取对数生长期的MDA MB 231细胞，计 数并调整密度为1.2X108/L,以每孔100接种于96孔板中培养，15 h后更换 培养基，设置对照组和不同浓度药物组（罗格列酮1x10-8, 1x10-7, 1x10-6, 1x10-5, 1x10-4 mol/L）,每组设8个复孔.继续培养24 h后，加入10^LMTT（5 g/L）,继续孵育4 h,弃上清，每孔加入100（iL DMSO,振荡10 min待结晶溶解, 于酶标仪上测定570 nm波长的A值，计算不同浓度罗格列酮对MDA MB 231 细胞的生长抑制率：细胞抑制率(％) = [1 —试验组A570nm/对照组A570nm] xlOO%.将药物浓度的对数值和抑制率拟合后计算出IC50.试验重复3次. 1.2.3细胞增殖能力检测取对数生长期细胞，细胞计数并调整密度为5x107/ L，以每孔1 niL接种于6孔板中培养.第2日更换含不同药物组合的新鲜培养基， 包括 1 mL/LDMSO, 1 pnol/L 罗格列酮、5 pimol/L GW9662 以及 1 gmol/L 罗格 列酮与5 gmol/L GW9662联用共4个组，每48 h更换含相应药物的新鲜培养基. 分别于