章dn得a重组.pptVIP

第二章 DNA重组 2.1 DNA的组成和结构（略） 2.2 天然DNA的制备 2.2.1 天然DNA的来源和用途 2.2.2 天然DNA的提取 1、准备生物材料 选择生物种类；选择DNA易提取和含量高的组织；选择DNA得率最高的生长期。如: 大肠杆菌质粒DNA：应在对数生长期后期。 植物DNA：选幼嫩植株或黄化幼苗。 肝脏DNA：要清除胆囊。 2、裂解细胞 这步是关系到能否提取到DNA以及DNA得率高低和质量的关键步骤。 原核细胞：用溶菌酶， NaOH和SDS ，煮沸，冰冻，超声波等方法； 结构复杂的动、植物材料：先必须粉碎（液氮冻结后研磨，或捣碎机、研钵直接粉碎），再参照裂解原核的方法。 3 、分离和抽提DNA 提取总DNA：在裂解液中加适量酚／氯仿／异戊醇或氯仿／异戊醇等有机溶液，使DNA与蛋白质分开，用乙醇或异丙醇沉淀DNA，再离心。 提取叶绿体或线粒体等细胞器DNA以及病毒和噬菌体的DNA：须先从裂解液中分离完整细胞器、病毒和噬菌体，抽提前必须经DNase处理，水解附着于其表面的其它DNA。 提取质粒DNA：调节裂解液pH12.6，所有DNA都变性沉淀，再调节PH至中性，质粒DNA复性后从沉淀物中释出。 除RNA：用RNase水解除RNA， 分离抽提DNA最有效的方法：氯化铯梯度离心（氯化铯溶液中加适量溴化乙锭，紫外灯下DNA带和RNA带都发荧光，但沉降