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微生物学实验 （怀化学院微生物学课程组） 微生物学实验室学生要求 为了营造一个安全有效、秩序良好的实验室环境，达到 “科学、规范、安全、高效”的 目的，特对进入微生物学实验室进行实验的学生作如下要求。 1. 按已分好的班级组次，按时参加实验，并完成实验项目。 2. 进入实验室前，要求穿戴整齐，需穿好实验服，不能穿人字拖类拖鞋进入实验室。 3. 上课前要求上交当堂课程的实验预习报告。 4. 要求独立或以小组为单位完成实验项目，实验期间保持实验室安静，不能大声喧哗，并 及时记录好实验数据。 5. 实验完成后及时对实验结果进行分析并完成实验报告。 6. 实验完成后需及时清洗实验器皿，清洁和整理实验台，做好卫生，保持实验室干净整洁。 授课教师：刘卫今、黎晓英 微生物学实验 序号 实验项目名称 1 实验一、培养基的制备及灭菌 2 实验二、从土壤中分离和纯化微生物 3 实验三、细菌革兰氏染色法及芽孢染色法 4 实验四、油镜的使用和细菌形态的观察 5 实验五、放线菌、酵母菌和霉菌形态观察 6 实验六、微生物的显微计数 （以下实验内容仅供参考，具体内容以相应教材为准） 实验一 培养基的制备与灭菌 一、实验目的 1．掌握培养基配制的原理。 2．通过对牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、 马铃薯培养基的配制，掌握配制培养基 的一般方法和步骤。 3．解高压蒸汽灭菌的基本原理及操作方法。 二、实验原理 1．什么是培养基，一般培养基应具备哪些营养要素？ 2．培养基有哪些类型，为什么培养不同的微生物需要的培养基不同，培养基为什么要调节 pH 值，配制好的培养基为什么要立即灭菌？ 3．高压蒸汽灭菌的原理是什么？ 三、实验材料和用具 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖（或蔗糖）、链霉素、1mol/LNaOH、1mol/L H Cl、K HPO ·3H O、MgSO4·7H O、FeSO ·7H O 试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、 2 4 2 2 4 2 天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布和玻璃漏斗等。 四、操作步骤 (一 )牛肉膏蛋白胨培养基的配制 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。其配方如下: 牛肉膏3g，蛋白胨l0g，NaCl 5g，琼脂15-20g, 水1000mL，pH 7.4～7.6 1. 称量：按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯或 表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放人热水中，牛肉 膏便与称量纸分离，立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 2. 加热溶解：在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒 搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入已 溶解的药品中，再加热融化，在此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所 失的水分。 3. 调pH：检测培养基的pH，若pH偏酸，可滴加1mol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH 试纸检测，直至达到所需pH范围。若偏碱，则用1mol/LHCl进行调节。pH的调节通常放在 加琼脂之前。应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。 4. 过滤：液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利结果的观察。 但是供一般使用的培养基，此步可省略。 5. 分装：披实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用三角漏斗以 免使培养基沾在管口或瓶口上面造成污染。分装量：固体培养基约为试管高度的1／5，灭菌 后制