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Hormonal regulation of the death commitment in programmed cell death of the silkworm anterior silk glands    家蚕前部丝腺程序性死亡中死亡转型的激素调控研究 报告人：xxxx 导 师：xxx 专 业：xxxx 纲要 引言 实验 结论 问题 引言 昆虫幼虫到蛹转化过程中，组织响应20E产生各种生长变化，其逐渐获得20E响应能力的过程叫蛹的转型。如家蚕表皮，成虫盘等。 特点：1.对20E有响应能力 2.JH可以抑制20E响应的获得。 3.从JH逐渐失去敏感开始，到完全失去敏感结束。 (Riddiford, 1985; Obara et al., 2002; Koyamaet al., 2004） 家蚕的前部丝腺（ASG）在五龄5天（Ⅴ5）开始响应20E产生程序性死亡（PCD），在Ⅴ4到Ⅴ5对JH失去敏感。 （Kakei et al., 2005） 家蚕ASG是否也有和蛹转型相似的死亡转型？ ASG 葡萄糖氧化酶 （ GOD ） H2O2 20E的响应 PCD 引言 ASG的研究方式：体外培养 干扰ASG对20E响应的测定 （Matsui et al., 2011） 实验设计 排除GOD/H2O2干扰 确定20E响应获取时间 找出相关基因 JH是否与ASG获取20E响应有关系 确定JH失去敏感的时间 确定Kr-h1途径与20E响应获取的关系 扩大培养基体积培养 JHA处理蚕后取出ASG 用9ml 1 μM 20E培养 JHA处理不同龄期后取ASG用9ml 1 μM 20E JHA处理不同龄期蚕后测定Kr-h1表达水平 9ml 1 μM 20E培养ASG 形态学观察及电泳 实验 1. Ⅴ3的ASG在不同剂量Grace培养基培养 Ⅴ3的ASG在0.3,3,6,9 ml 1 μM 20E的Grace培养基培养144h 0.625 0.31 实验设计 排除GOD/H2O2干扰 确定20E响应获取时间 找出相关基因 JH是否与ASG获取20E响应有关系 确定JH失去敏感的时间 确定Kr-h1途径与20E响应获取的关系 扩大培养基体积培养 JHA处理蚕后取出ASG 用9ml 1 μM 20E培养 JHA处理不同龄期后取ASG用9ml 1 μM 20E JHA处理不同龄期蚕后测定Kr-h1表达水平 9ml 1 μM 20E培养ASG 形态学观察及电泳 选用9ml 1 μM 20E 蛹定型特点：1.对20E有响应能力 2.JH可以抑制20E响应的获得。 3.从JH逐渐失去敏感开始，到完全失去敏感结束 实验 2.1.ASG获得20E响应的时间 取各时期的ASG在9ml 1 μM +20E和-20E的Grace培养基培养144h 实验 2.2.光镜观察和DAPI染色及20E相关基因的表达 V1 V2 +20E -20E Score 0 Score 6 Type B 9ml培养8h 实验设计 排除GOD/H2O2干扰 确定20E响应获取时间 找出相关基因 JH是否与ASG获取20E响应有关系 确定JH失去敏感的时间 确定Kr-h1途径与20E响应获取的关系 扩大培养基体积培养 JHA处理蚕后取出ASG用9ml 1 μM 20E培养 JHA处理不同龄期后取ASG用9ml 1 μM 20E JHA处理不同龄期蚕后测定Kr-h1表达水平 9ml 1 μM 20E培养ASG 形态学观察及电泳 选用9ml 1 μM 20E V2的ASG完全响应20E完成PCD 蛹定型特点：1.对20E有响应能力。 2.JH可以抑制20E响应的获得。 3.从JH逐渐失去敏感开始，到完全失去敏感结束。 实验 3.JH对20E响应能力获得的影响 A B A.Ⅳ3去除CA，幼虫0.1μg JHA处理, Ⅴ0用9ml 0.1μM 20E培养144H B. Ⅳ3去除CA，幼虫Ⅴ0时0.1μg JHA处理，Ⅴ3取出ASG用9ml 0.1μM 20E培养144H 实验设计 排除GOD/H2O2干扰 确定20E响应获取时间 找出相关基因 JH是否与ASG获取20E响应有关系 确定JH失去敏感的时间 确定Kr-h1途径与20E响应获取的关系 扩大培养基体积培养 JHA处理蚕后取出ASG后用9ml 1 μM 20E培养 JHA处理不同龄期蚕后取ASG用9ml 1 μM 20E JHA处理不同龄期蚕后测定Kr-h1