沉淀反应-液相内沉淀试验.ppt

沉淀反应PRECIPITATION 第一节 液相内沉淀试验 （一）透射比浊法 用于免疫沉淀反应的一些缺陷： (1)溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大，分子太小则阻挡不了光线的通过。 (2)溶液中的抗原－抗体复合物的数量要足够多。如果数量太小，溶液浊度变化太小，对光通量影响不大。 (3) 透射比浊是依据透射光减弱的原理来定量的，因此只能测定抗原－抗体反应的第二阶段，检测仍需抗原－抗体温育反应时间，检测时间较长。 （二）散射比浊法 1.速率散射比浊法 2.终点散射比浊法 用于免疫沉淀反应的缺陷 (1)因为是一次性测定光吸收值，没有考虑每一个待测样本的吸收和散射效果，可测定结果不准确 (2)测定的仍是抗原－抗体反应的第二阶段，不适合快速检测。 (3) 终点法存在反应本底，测定样本的含量越低，本底比例越大，故在微量测定时，本底的干扰是影响准确测定的重要因素。 影响免疫比浊测定的因素 1、抗原抗体比例 2、抗体的质量 抗体的特异性、效价、亲和力、R型和H型抗体 3、反应的溶液 4、增浊剂的使用 设计特点 (1)方法学的选择： Immage检测仪除保留了原有的速率散射比浊法外，新增加了近红外速率透射比浊分析，以使检测范围进一步扩大，检测敏感性和准确性进一步提高。 (2)抗原过量的检测：对反应介质中PEG对血浆样本中其它蛋白质类物质发生非特异沉淀作用而引起的非特异干扰信号的出现作出了新的防范处理。 (3)新的检测项目和方法： 四种方法分别是：速率散射比浊法、速率免疫抑制法、近红外颗粒速率免疫分析法、近红外颗粒速率散射抑制法。 其中速率散射比浊法和近红外颗粒速率散射抑制法最主要用于体液（主要血浆）中小分子药物浓度的检测。这些方法的合理使用，使Immage进一步扩大了检测菜单。 检测项目分类组合： (?一)?心血管疾病　　　　　　?(二)?血液病检测项目：　　　　　　　　　　?检测项目：载脂蛋白A-1　　　　　　　　　　抗凝血酶III载脂蛋白B　　　　　　　　　　?转铁蛋白脂蛋白(a)　　　　　　　　　　?触珠蛋白超敏CRP　　　　　　　　　　　　?B因子 (三)?肾功能监测　　　　　　　　(四)?神经系统疾病检测项目　　　　　　　　　　　　检测项目：尿微量白蛋白　　　　　　　　　　白蛋白转铁蛋白　　　　　　　　　　　　α2-巨球蛋白α2-巨球蛋白　　　　　　　　　　?IgA、?IgG、IgMβ2-微球蛋白　　　　　　　　　　　　　　α1-微球蛋白IgG,?IgA痕迹蛋白 (五)免疫功能障碍　　　　　　?(六)营养状态监测免疫球蛋白A　　　　　　　　　　检测项目：免疫球蛋白G　　　　　　　　　　白蛋白免疫球蛋白M　　　　　　　　　　前白蛋白免疫球蛋白E　　　　　　　　　　转铁蛋白lgG亚型　　　　　　　　　　　　铁蛋白κ轻链/游离κ轻连　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　λ轻链/游离λ轻连补体C3补体C4C-反应蛋白(CRP) (七)?炎症状况监测　　　　　　?(八)类风湿性关节炎检测项目：　　　　　　　　　　?检测项目C-反应蛋白　　　　　　　　　　?类风湿因子α1-酸性糖蛋白　　　　　　　　?C-反应蛋白触珠蛋白　　　　　　　　　　　　抗链球菌溶血素O铜蓝蛋白DNase-B (九)肝脏疾病　　　　　　　　?(十)新生儿体检α1-抗胰蛋白酶　　　　　　　　?α1-抗胰蛋白酶抗凝血酶Ⅲ　　　　　　　　　　?C-反应蛋白铜蓝蛋白　　　　　　　　　　?前白蛋白补体C3、C4免疫球蛋白A、M （十一）药物浓度地高辛卡马西平苯巴比妥茶碱采布霉素苯妥因VPA庆大霉素 第二节 凝胶内沉淀试验 影响因素 二、双向琼脂扩散试验 一、单向琼脂扩散试验: (single gel diffusion test) 试管法 平板法 二、双向琼脂扩散试验： (double gel diffusion test) Ab Ag 试管法 单向琼脂扩散试验 原理 把抗原液小心地加于已含抗体琼脂的细试管内，当对应的抗原与抗体相遇，在界面处形成清晰的乳白色沉淀环。 方法评价： 敏感度较低、简便、 快速、实用、只能 定性不能定量、缺 乏多对分辨力。 临床意义： 排泄物和组织匀浆中的细菌、寄生虫、螺旋体的检测。 平板法 标准品抗原浓度测定 不同病人抗原浓度测定 原理 将一定量的抗体混入琼脂凝胶中，使待测抗原在凝胶中自由扩散，与相应抗体结合形成沉淀环，沉淀环大